原理：生物素是植物乳桿菌生長所必需的營養(yǎng)素，在生物素測定培養(yǎng)基中，植物乳桿菌的生長與待測試樣中生物素含量呈線性關(guān)系。通過測定透光率，與標(biāo)準(zhǔn)工作曲線進(jìn)行比較，即可計算出試樣中生物素的含量。

基本要求：

檢驗環(huán)境：生物素測定工作在一級生物安全實驗室進(jìn)行即可。需注意避免不同樣品間器具交叉污染，同時防止環(huán)境對樣品和操作過程的污染。

檢驗人員：檢驗人員應(yīng)具備生物安全上崗證、壓力容器上崗證、微生物檢驗人員上崗證。

檢驗用培養(yǎng)基：選用乳酸桿菌瓊脂培養(yǎng)基、乳酸桿菌肉湯培養(yǎng)基、生物素測定培養(yǎng)基，均應(yīng)符合 GB 4789.28-2013的質(zhì)量要求。

分析步驟：

試樣制備：谷薯類、豆類、乳粉等試樣需粉碎、研磨、過篩；肉、蛋、魚、堅果等制成食糜；果蔬、半固體食品等勻漿混勻；液體試樣振搖混合。制備好的試樣于4℃冰箱保存，1 周內(nèi)測定。

試樣提?。翰煌愋驮嚇犹崛》椒ú煌?。如天然食品（薯類、肉類等），稱取適量均質(zhì)樣品，加檸檬酸緩沖液高壓水解，冷卻后加蛋白酶- 淀粉酶溶液酶解，再加熱、冷卻，定容；嬰幼兒配方食品等，加溶液水解，冷卻后調(diào) pH，定容過濾，再取濾液調(diào) pH后定容；強化生物素的飲料或維生素預(yù)混料等，液體飲料直接稀釋，維生素預(yù)混料加水混勻。

稀釋：根據(jù)試樣中生物素含量，用水對試樣提取液進(jìn)行適當(dāng)稀釋，使稀釋后試樣提取液中生物素含量在0.01ng/mL-0.1ng/mL 范圍內(nèi)。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：將生物素標(biāo)準(zhǔn)品配制成系列濃度標(biāo)準(zhǔn)溶液，加入生物素測定用培養(yǎng)液，接種植物乳桿菌，培養(yǎng)后測定吸光值。以標(biāo)準(zhǔn)系列管生物素含量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

試樣測定：將稀釋后的試樣提取液加入生物素測定用培養(yǎng)液，接種植物乳桿菌，按與標(biāo)準(zhǔn)曲線制備相同條件培養(yǎng)，測定吸光值。

結(jié)果計算：從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得樣液相應(yīng)含量，若每個試樣的測試管中有值落在合適范圍內(nèi)，且測試管之間吸光值偏差小于10%，則可按公式計算樣品中生物素含量。計算結(jié)果以重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的算術(shù)平均值表示，結(jié)果保留三位有效數(shù)字。

精密度：在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的差值不得超過算術(shù)平均值的 10%。

線性范圍、檢出限和定量限：本方法線性范圍為 0.01ng/mL-0.1ng/mL，檢出限為2.0μg/100g（mL），定量限為 4.0μg/100g（mL）。