原理：試樣中的膽堿用氫氧化鋇 - 甲醇 -混合溶液水解抽提，經(jīng)弗羅里硅土層析凈化，與雷納克銨鹽溶液形成粉紅色的膽堿雷納克銨鹽，用溶解洗脫，于 526nm測(cè)定吸收值。在一定濃度范圍內(nèi)，膽堿雷納克銨鹽顏色的深淺與其含量成正比。

試劑和材料：

膽堿酒石酸氫鹽標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99%。

弗羅里硅土：60-120 目，650℃活化。

其他試劑：包括氫氧化鋇、甲醇、、雷納克銨鹽、等，均為分析純，水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級(jí)水。

標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：膽堿酒石酸氫鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液（1g/L），準(zhǔn)確稱取在 102℃±2℃烘至恒重的膽堿酒石酸氫鹽0.1000g，用蒸餾水定容至 100mL 容量瓶中。

分析步驟：

試樣處理：稱取一定量試樣，置于磨口三角瓶中，加入氫氧化鋇 - 甲醇 - 抽提液，接上冷凝管，在 79±2℃的水浴鍋內(nèi)水解4小時(shí)，不時(shí)搖動(dòng)三角瓶。水解液冷卻后，過(guò)濾，取濾液待凈化。將濾液轉(zhuǎn)移至已活化的弗羅里硅土層析柱中，用適當(dāng)溶劑洗滌柱子，然后用雷納克銨鹽溶液洗脫，使膽堿與雷納克銨鹽形成粉紅色的膽堿雷納克銨鹽吸附在柱上。Zui后用溶解洗脫，收集洗脫液于容量瓶中，定容。

標(biāo)準(zhǔn)曲線制備：從 1g/L 的膽堿標(biāo)準(zhǔn)工作液中，分別吸取1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL，注入層析柱中，按樣液層析步驟，收集粉紅色的膽堿雷納克鹽標(biāo)準(zhǔn)溶液并定溶于10mL。以為空白，在 526nm 處測(cè)定其吸光值。以膽堿含量為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

樣品測(cè)定：將制備好的試樣溶液注入分光光度計(jì)，在 526nm 處測(cè)定吸光值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算試樣中膽堿的含量。

結(jié)果計(jì)算：試樣中膽堿含量以每 100g 或 100mL中膽堿的毫克數(shù)表示，計(jì)算公式為：X=(c×V×100)/(m×1000)。式中，X 為試樣中膽堿含量（mg/100g 或mg/100mL）；c 為從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的膽堿濃度（μg/mL）；V 為試樣定容體積（mL）；m 為試樣質(zhì)量或體積（g 或mL）。

方法檢出限：該方法的檢出限為 50mg/kg。