適用范圍：適用于片劑、膠囊、粉劑、功能性飲料類型保健食品中維生素 B12 的測定。

原理：采用免疫親和色譜法對試樣提取液中的維生素 B12 進行富集并去除部分雜質，再通過高效液相色譜分析測定維生素 B12的含量。

檢出限：當應用免疫親和法處理樣品時，片劑、膠囊、粉劑取樣量為 2.0g，方法的檢出限為0.05μg/g；功能性飲料取樣量為 20mL，方法的檢出限為 3.0μg/L。

操作要點：通常需使用維生素 B12 免疫親和柱，其采用柱狀瓊脂糖凝膠作為固相載體，瓊脂糖凝膠與維生素 B12抗體偶聯形成免疫吸附劑。樣品經提取后，將提取液通過免疫親和柱，維生素 B12會與柱上的抗體特異性結合，而其他雜質則被洗脫除去。然后用適當的洗脫液將維生素 B12從柱上洗脫下來，收集洗脫液，供高效液相色譜分析。

儀器分析：將洗脫液注入高效液相色譜儀，選擇合適的色譜柱、流動相、檢測波長等參數進行分析，根據標準品的色譜峰面積和濃度繪制標準曲線，再根據樣品的色譜峰面積，從標準曲線上查得樣品溶液中維生素B12 的濃度，進而計算出保健食品中維生素 B12 的含量。