GB/T 《實驗動物小鼠肝炎病毒檢測方法》規(guī)定了小鼠肝炎病毒（MHV）的檢測方法及試劑要求，適用于實驗動物MHV的檢測，以下是對該標(biāo)準(zhǔn)的詳細解讀：

一、標(biāo)準(zhǔn)基本信息

標(biāo)準(zhǔn)號：GB/T

中文標(biāo)準(zhǔn)名稱：實驗動物 小鼠肝炎病毒檢測方法

英文標(biāo)準(zhǔn)名稱：Laboratory animal--Method for examination ofmouse hepatitis virus（MHV）

標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)：現(xiàn)行（但需注意，該標(biāo)準(zhǔn)已被國家標(biāo)準(zhǔn)計劃20233816-T-306《實驗動物小鼠肝炎病毒檢測方法》全部代替，新標(biāo)準(zhǔn)正在批準(zhǔn)中）

發(fā)布日期：2001年8月29日

實施日期：2002年5月1日

主管部門：科技部

歸口部門：科技部

發(fā)布單位：中華人民共和國國家質(zhì)量監(jiān)督檢驗檢疫總局

二、檢測方法

標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了三種血清學(xué)檢測方法，包括酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）、免疫熒光試驗（IFA）和免疫酶試驗（IEA）。

酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA）

原理：根據(jù)免疫學(xué)原理，采用MHV抗原檢測小鼠血清中MHV抗體。抗原抗體反應(yīng)后，加入酶標(biāo)記的二抗，通過酶催化底物顯色來檢測抗體。

操作步驟：包括包被抗原、封閉、加樣、孵育、洗滌、加酶標(biāo)二抗、顯色、終止反應(yīng)等步驟。

結(jié)果判定：用酶標(biāo)儀測定吸光值，根據(jù)吸光值判斷樣本是否為陽性。

免疫熒光試驗（IFA）

原理：采用MHV抗原檢測小鼠血清中MHV抗體。抗原抗體反應(yīng)后，加入熒光素標(biāo)記的二抗，通過熒光顯微鏡觀察熒光信號來判斷是否感染。

操作步驟：包括抗原片準(zhǔn)備、加樣、孵育、洗滌、加熒光標(biāo)記二抗、洗滌、熒光顯微鏡下觀察等步驟。

結(jié)果判定：在熒光顯微鏡下以熒光的有無和強弱判定結(jié)果。

免疫酶試驗（IEA）

原理：與ELISA類似，也是基于抗原抗體反應(yīng)的特異性進行檢測。

操作步驟：包括抗原準(zhǔn)備、加樣、孵育、洗滌、加酶標(biāo)抗體、顯色等步驟。

結(jié)果判定：通過觀察顏色反應(yīng)判斷樣本是否為陽性。

三、試劑要求

ELISA抗原

特異性抗原：MHV（包括MHVMHVa、MHV-A、MHV-JHM四個毒株）感染DBT或L929細胞，接種后2~4d病變達+++時收獲。凍融三次或超聲波處理后，低速離心去除細胞碎片，上清液再經(jīng)超速離心濃縮后制成ELISA抗原。

正?？乖篋BT或L929細胞凍融破碎后，經(jīng)低速離心去除細胞碎片而獲得的上清液。

抗原片：MHV感染DBT或L929細胞，接種后1~2d病變達++~+++時用胰酶消化分散，PBS洗滌，涂片。室溫干燥后，冷固定10min，-20℃保存。

陽性血清：MHV抗原免疫清潔或SPF小鼠所獲得的抗血清。

陰性血清：清潔或SPF小鼠血清。

酶結(jié)合物：辣根過氧化物酶標(biāo)記羊或兔抗小鼠IgG抗體；或辣根過氧化物酶標(biāo)記葡萄球菌蛋白A（SPA）。

熒光素標(biāo)記：異硫氰酸熒光素標(biāo)記羊或兔抗小鼠IgG抗體。

四、檢測流程與結(jié)果判定

試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值應(yīng)≥1.00，陰性對照孔OD值平均值應(yīng)≤0.15。若不滿足此條件，試驗無效。

臨界值計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15。

結(jié)果判定：

若樣品OD值<臨界值，樣品為陰性。

若樣品OD值>臨界值，樣品為陽性。

復(fù)檢：對陽性檢測結(jié)果，應(yīng)選用同一種方法或另一種方法重試。如仍為陽性則判為陽性。