GB/T標(biāo)準(zhǔn)中5.1部分主要規(guī)定了采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）方法進(jìn)行犬細(xì)小病毒（CPV）的血清學(xué)檢測，以下是詳細(xì)介紹：

一、檢測原理

根據(jù)免疫學(xué)原理，采用CPV抗原檢測犬血清中CPV抗體；或根據(jù)CPV在一定的條件下，能凝集豬或恒河猴的紅細(xì)胞，這種凝集紅細(xì)胞的能力可被特異性抗體所抑制的原理，檢測犬血清中CPV抗體。

二、主要試劑和器材

1. 試劑

2. ELISA抗原：包括特異性抗原和正?？乖?。特異性抗原是用CPV感染FK81細(xì)胞后制備的，正?？乖瓌t是FK81細(xì)胞凍融破碎后獲得的上清液。

3. 陽性血清：CPV實(shí)驗(yàn)感染或自然感染的犬血清。

4. 陰性血清：無CPV感染、未經(jīng)免疫的犬血清。

5. 酶結(jié)合物：辣根過氧化物酶標(biāo)記羊或兔抗犬IgG抗體。

6. 豬或恒河猴紅細(xì)胞。

7. 器材

8. 酶標(biāo)儀。

9. 37℃培養(yǎng)箱或水浴箱。

10. 冰箱。

三、檢測步驟

1. 包被抗原：將特異性抗原和正?？乖謩e包被于聚苯乙烯板上，進(jìn)行孵育和保存。

2. 洗滌：用洗滌液洗去未結(jié)合的抗原和雜質(zhì)。

3. 加樣：將待檢血清、陽性血清和陰性血清分別加入包被有抗原的孔中，進(jìn)行孵育。

4. 加酶結(jié)合物：加入酶結(jié)合物，與血清中的抗體結(jié)合，進(jìn)行孵育。

5. 加底物溶液：加入底物溶液，酶催化底物顯色。

6. 終止反應(yīng)：加入終止液，停止酶催化反應(yīng)。

7. 測吸光值：在酶標(biāo)儀上讀取各孔的吸光值。

四、結(jié)果判定

1. 基礎(chǔ)級犬：接種疫苗后，經(jīng)ELISA檢測抗體效價(jià)大于等于1:160判為合格。

2. SPF級犬：不應(yīng)進(jìn)行疫苗接種，對陽性檢測結(jié)果，選用同一種方法或另一種方法重試。如為陽性則判為陽性。

3. 基礎(chǔ)級犬群體免疫抗體合格率：免疫抗體合格率=（被檢動物抗體陽性數(shù)/被檢動物總數(shù)）×。基礎(chǔ)級犬群體免疫抗體合格率大于等于70%以上可判為該犬群免疫合格。