大豆異黃酮含量測定,GB/T 26625-2011檢測機構-99國產在線精品視頻メイリン モデルコレクション メ_國產精品無卡無在線播放
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GB/T 26625-2011《糧油檢驗 大豆異黃酮含量測定高效液相色譜法》規(guī)定了采用高效液相色譜法（HPLC）測定大豆及其制品中主要異黃酮成分的方法，以下是對該標準的詳細介紹：
該標準適用于大豆、豆奶粉、豆豉中大豆異黃酮含量的測定，測試方法的Zui低檢測限為2.5mg/kg。
試樣用甲醇-水溶液超聲波振蕩提取，提取液經離心、濃縮、定容、過濾后，用高效液相色譜儀測定，外標法定量。
試劑：除另有說明外，所用試劑均為分析純，水應符合GB/T 6682中一級水的規(guī)定。包括乙腈（色譜純）、甲醇、乙酸等。
標準品：大豆甙（daidzin）、染料木甙（genistin）、大豆黃素（daidzein）、染料木素（genistein）、黃豆黃素（glycitin）、黃豆黃素甙元（glycitein），純度均不低于98%。
標準溶液配制：
大豆異黃酮標準儲備溶液：分別準確稱取適量的大豆甙、染料木甙等標準品，用60%甲醇配成濃度為1mg/mL的標準儲備溶液，-18℃避光保存，有效期6個月。
大豆異黃酮混合標準中間溶液：分別移取上述各組分大豆異黃酮標準儲備溶液0.5mL于同一10mL容量瓶中，用60%甲醇定容至刻度，配制成各組分濃度為50μg/mL的大豆異黃酮混合標準中間溶液，0℃~4℃冷藏避光保存，有效期3個月。
大豆異黃酮混合標準工作溶液：分別吸取不同體積的大豆異黃酮混合標準中間溶液于10mL容量瓶中，用10%甲醇溶液配成各組分濃度0.25μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、1.50μg/mL、5.00μg/mL系列的大豆異黃酮混合標準工作溶液，0℃~4℃冷藏避光保存，有效期一周。
其他材料：濾膜（0.45μm）。
高效液相色譜儀：配紫外檢測器。
分析天平：感量0.01mg、感量0.01g。
旋轉蒸發(fā)器。
超聲波清洗器：50W。
離心機：10000r/min。
粉碎機。
組織搗碎機。
濃縮瓶：250mL。
樣品篩：孔徑2.0mm。
大豆：取有代表性樣品約500g，用粉碎機粉碎使其全部通過孔徑2.0mm樣品篩，混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封備用。
豆豉：取有代表性樣品約500g，用組織搗碎機搗碎，混勻，裝入潔凈容器作為試樣，密封備用。
試樣保存：粉碎試樣于4℃以下保存。
提?。悍Q取5g（到0.01g）試樣于250mL具塞三角瓶中，加90mL90%甲醇溶液，置于超聲波清洗器中60℃提取30min，在離心機中10000r/min離心10min，上清液轉移至250mL濃縮瓶中，殘渣再加入60mL90%甲醇溶液進行提取，上清液也轉入250mL濃縮瓶，在旋轉蒸發(fā)器60℃濃縮至約40mL。濃縮液轉入50mL容量瓶，用10%甲醇溶液沖洗濃縮瓶并定容至刻度。取1mL提取液通過0.45μm濾膜，供高效液相色譜儀測定。
色譜參考條件：
色譜柱：RPC18柱（250mm×4.6mm，5μm）或性能相當?shù)纳V柱。
流動相：0.1%乙酸溶液和0.1%乙酸乙腈溶液，按表1的規(guī)定進行梯度洗脫。
流速：1.0mL/min。
柱溫：40℃。
波長：260nm。
進樣量：20μL。
測定：參考上述色譜條件調節(jié)高效液相色譜儀，使大豆異黃酮各組分的色譜峰完全分離。分別吸取適當濃度的大豆異黃酮混合標準工作液和樣液進行液相色譜測定，分別得到大豆異黃酮各組分的標準工作液峰面積和樣液大豆異黃酮各組分峰面積。如果樣液中大豆異黃酮某一組分峰面積與標準工作溶液中的該組分峰面積相差較大時，稀釋樣液或調整標準工作液濃度后再行測定。
大豆異黃酮各組分含量按特定公式計算試樣中大豆異黃酮各組分含量（mg/kg）。
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