標(biāo)準(zhǔn)編號(hào)：GB/T

標(biāo)準(zhǔn)名稱：實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 猴免疫缺陷病毒檢測方法

發(fā)布日期：2001年8月29日

實(shí)施日期：2002年5月1日

主管部門：科技部

歸口單位：全國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)（TC281）

起草單位：中國實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)會(huì)

主要起草人：田克恭

標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)：現(xiàn)行有效（截至2023年12月28日復(fù)審結(jié)論）

原理：基于抗原抗體特異性結(jié)合的原理，通過酶標(biāo)記物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合，加入底物顯色來檢測樣本中的SIV抗體。

步驟：包括抗原包被、加樣、孵育、加酶結(jié)合物、底物顯色等。

關(guān)鍵要點(diǎn)：

抗原的制備純度對檢測結(jié)果至關(guān)重要。

操作過程中需嚴(yán)格控制溫度、時(shí)間等條件。

需設(shè)置對照（空白對照、陰性對照、陽性對照）以監(jiān)控實(shí)驗(yàn)誤差。

原理：利用熒光標(biāo)記的抗體與抗原結(jié)合，在熒光顯微鏡下觀察熒光信號(hào)。

步驟：包括抗原片制備、加樣、孵育、洗滌、鏡檢等。

關(guān)鍵要點(diǎn)：

抗原片的質(zhì)量直接影響檢測結(jié)果。

熒光顯微鏡的校準(zhǔn)和使用需規(guī)范。

避免樣本間交叉污染。

原理：通過擴(kuò)增SIV的特定基因片段來檢測病毒的存在。

步驟：包括樣本RNA提取、cDNA合成、PCR擴(kuò)增、電泳檢測或?qū)崟r(shí)熒光檢測等。

關(guān)鍵要點(diǎn)：

引物和探針的設(shè)計(jì)需針對SIV的保守序列。

操作過程中需防止RNA降解和交叉污染。

實(shí)時(shí)熒光RT-PCR具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、可定量等優(yōu)點(diǎn)。

樣本類型：血清、血漿、組織等。

采集要求：無菌操作、避免溶血、及時(shí)處理與保存等。

處理步驟：包括離心分離血清、RNA提取、cDNA合成等。

嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）：確保每一步操作都符合標(biāo)準(zhǔn)要求。

設(shè)置對照：包括陽性對照、陰性對照和空白對照，以監(jiān)控檢測過程的準(zhǔn)確性。

防污染措施：避免樣本間、試劑間、環(huán)境間的交叉污染。

抗體檢測結(jié)果判定：對陽性或可疑結(jié)果，選用同一種抗體檢測方法或另一種抗體檢測方法復(fù)測。如仍為陽性則判為陽性。

核酸檢測結(jié)果判定：對陽性或可疑結(jié)果，用同一種核酸檢測方法復(fù)測，或取可疑陽性樣本PCR產(chǎn)物進(jìn)行核酸序列測定。如仍為陽性，則判為陽性。

試劑質(zhì)量控制：使用有國家批準(zhǔn)文號(hào)的合格試劑，定期進(jìn)行質(zhì)量驗(yàn)證。

儀器設(shè)備校準(zhǔn)：定期對酶標(biāo)儀、熒光顯微鏡、PCR儀等儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。

人員培訓(xùn)與考核：檢測人員需具備相關(guān)專業(yè)學(xué)歷與從業(yè)資格，經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)操作培訓(xùn)考核合格后方可上崗。

實(shí)驗(yàn)室間比對與能力驗(yàn)證：定期開展實(shí)驗(yàn)室間比對、能力驗(yàn)證等活動(dòng)，提升檢測結(jié)果的準(zhǔn)確性與可靠性。