GB/T 7918.2-1987《化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定》是我國(guó)現(xiàn)行的化妝品細(xì)菌總數(shù)檢測(cè)基礎(chǔ)國(guó)標(biāo)，采用標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法測(cè)定化妝品中需氧及兼性厭氧嗜中溫細(xì)菌總數(shù)，為化妝品衛(wèi)生學(xué)評(píng)價(jià)提供關(guān)鍵依據(jù)。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的核心要點(diǎn)：

一、標(biāo)準(zhǔn)基本信息

標(biāo)準(zhǔn)號(hào)：GB/T 7918.2-1987

發(fā)布日期：1987年5月28日

實(shí)施日期：1987年10月1日

主管部門：中國(guó)輕工業(yè)聯(lián)合會(huì)

歸口單位：全國(guó)香料香精化妝品標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會(huì)

起草單位：“化妝品微生物標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法”起草小組

主要起草人：周淑玉

標(biāo)準(zhǔn)狀態(tài)：現(xiàn)行有效（Zui近一次復(fù)審于2024年8月23日完成，結(jié)論為繼續(xù)有效）

二、檢測(cè)方法原理

標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)法：基于細(xì)菌在適宜培養(yǎng)基上生長(zhǎng)繁殖形成菌落的特性，通過(guò)梯度稀釋、涂布培養(yǎng)、計(jì)數(shù)菌落數(shù)量，結(jié)合稀釋倍數(shù)推算化妝品中的細(xì)菌總數(shù)。

檢測(cè)對(duì)象：在卵磷脂、吐溫80營(yíng)養(yǎng)瓊脂上，于37℃培養(yǎng)48h生長(zhǎng)的一群嗜中溫的需氧及兼性厭氧細(xì)菌總數(shù)。

三、檢測(cè)流程與關(guān)鍵要求

樣品采集與處理：

取樣：從≥2個(gè)包裝單位取10g/10mL樣品，小包裝可酌減；保持原包裝，無(wú)菌操作防二次污染。

供試液制備：用無(wú)菌生理鹽水稀釋，含防腐劑樣品需加中和劑（如卵磷脂、吐溫80）消除抑菌干擾，稀釋后1h內(nèi)完成注皿。

培養(yǎng)基與試劑：

核心培養(yǎng)基：卵磷脂-吐溫80-營(yíng)養(yǎng)瓊脂（蛋白胨20g、牛肉膏3g、氯化鈉5g、瓊脂15g、卵磷脂1g、吐溫807g、蒸餾水1000mL，pH 7.2±0.2）。

輔助試劑：無(wú)菌生理鹽水、稀釋液、中和劑（按需）。

梯度稀釋：

取10g/mL樣品→加90mL稀釋液→做10?1、10?2、10?3等梯度，搖勻。

注皿培養(yǎng)：選2-3個(gè)稀釋度，各取1mL加入無(wú)菌平皿，傾入約15mL冷卻至45℃的培養(yǎng)基，混勻凝固；37℃培養(yǎng)48h。

菌落計(jì)數(shù)：

若平皿中有連成片狀的菌落或花點(diǎn)樣菌落蔓延生長(zhǎng)時(shí)，該平皿不宜計(jì)數(shù)。

若片狀菌落不到平皿中的一半，而其余一半中菌落數(shù)分布又很均勻，則可將此半個(gè)平皿菌落計(jì)數(shù)后乘2，以代表全皿菌落數(shù)。

計(jì)數(shù)原則：選取平均菌落數(shù)在30-300之間的平皿，按規(guī)則計(jì)算并報(bào)告。

特殊情況處理：

結(jié)果報(bào)告：

當(dāng)只有一個(gè)稀釋度的平均菌落數(shù)符合30-300范圍時(shí)，即以該平皿菌落數(shù)乘其稀釋倍數(shù)。

若有兩個(gè)稀釋度，其平均菌落數(shù)均在30-300個(gè)之間，則應(yīng)求出兩者菌落總數(shù)之比值來(lái)決定。若其比值小于或等于2應(yīng)報(bào)告其平均數(shù)，若大于2則報(bào)告其中較小的菌落數(shù)。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均大于300個(gè)，則應(yīng)按稀釋度Zui高的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均少于30個(gè)，則應(yīng)按稀釋度Zui低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30-300個(gè)之間，其中一個(gè)稀釋度大于300個(gè)，而相鄰的另一稀釋度小于30個(gè)時(shí)，則以接近30或300的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)報(bào)告之。

若所有的稀釋度均無(wú)菌生長(zhǎng)，報(bào)告數(shù)為每克或每毫升小于10個(gè)。

單位：CFU/g或CFU/mL（colony forming units pergram或colony forming units per milliliter），保留有效數(shù)字并注明培養(yǎng)條件。

判定規(guī)則：

四、儀器設(shè)備與質(zhì)量控制

儀器設(shè)備：

培養(yǎng)基制備與滅菌設(shè)備：高壓蒸汽滅菌器（121℃滅菌20min，保證培養(yǎng)基與器皿無(wú)菌）。

恒溫培養(yǎng)箱：控溫精度±1℃，確保37℃穩(wěn)定培養(yǎng)。

膜過(guò)濾法輔助設(shè)備：針對(duì)低菌或含抑菌成分樣品，限度儀需支持濾膜（47mm/50mm）適配、壓力穩(wěn)定（0.05-0.08MPa），可搭配中和劑過(guò)濾，提升回收率。

無(wú)菌設(shè)計(jì)：過(guò)濾杯、管路用316L不銹鋼，耐受121℃滅菌；可選一次性無(wú)菌杯，杜絕交叉污染。

多聯(lián)支架：支持平行樣同步檢測(cè)，符合標(biāo)準(zhǔn)重復(fù)性要求。

質(zhì)量控制：

每批次實(shí)驗(yàn)需設(shè)置空白對(duì)照：驗(yàn)證培養(yǎng)基無(wú)菌性。

稀釋過(guò)程需確保菌體分散：避免菌落堆積影響計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性。

避免化妝品原料的抑菌現(xiàn)象：使用對(duì)照試驗(yàn)以驗(yàn)證結(jié)果的準(zhǔn)確性。