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食品微生物學(xué)檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)GB 4789.5-2012第三方檢測機(jī)構(gòu),GB 4789.5-2012標(biāo)準(zhǔn)檢測-嗯灬啊灬把腿張開灬A片MBA-午夜福利不卡在線視頻

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全國

GB 4789.5-2012《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品微生物學(xué)檢驗(yàn)志賀氏菌檢驗(yàn)》規(guī)定了食品中志賀氏菌的檢驗(yàn)方法,適用于各類食品中志賀氏菌的檢驗(yàn)。以下是該標(biāo)準(zhǔn)的核心內(nèi)容:

一、設(shè)備和材料

除微生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)滅菌及培養(yǎng)設(shè)備外,還包括:

  • 恒溫培養(yǎng)箱:36℃±1℃

  • 冰箱:2℃~5℃

  • 膜過濾系統(tǒng)

  • 厭氧培養(yǎng)裝置:41.5℃±1℃

  • 電子天平:感量0.1g

  • 顯微鏡:10×~100×

  • 均質(zhì)器

  • 振蕩器

  • 無菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸頭

  • 無菌均質(zhì)杯或無菌均質(zhì)袋:容量500mL

  • 無菌培養(yǎng)皿:直徑90mm

  • pH計(jì)或pH比色管或精密pH試紙

  • 全自動微生物生化鑒定系統(tǒng)

  • 二、培養(yǎng)基和試劑

  • 志賀氏菌增菌肉湯-新生霉素

  • 麥康凱(MAC)瓊脂

  • 木糖賴氨酸脫氧膽酸鹽(XLD)瓊脂

  • 志賀氏菌顯色培養(yǎng)基

  • 三糖鐵(TSI)瓊脂

  • 營養(yǎng)瓊脂斜面

  • 半固體瓊脂

  • 葡萄糖銨培養(yǎng)基

  • 尿素瓊脂

  • β-半乳糖苷酶培養(yǎng)基

  • 氨基酸脫羧酶試驗(yàn)培養(yǎng)基

  • 糖發(fā)酵管

  • 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基

  • 粘液酸鹽培養(yǎng)基

  • 蛋白胨水、靛基質(zhì)試劑

  • 志賀氏菌屬診斷血清

  • 生化鑒定試劑盒

  • 三、檢驗(yàn)程序

    1. 增菌:以無菌操作取檢樣25g(mL),加入裝有滅菌225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)杯,用旋轉(zhuǎn)刀片式均質(zhì)器以8000r/min~10000r/min均質(zhì);或加入裝有225mL志賀氏菌增菌肉湯的均質(zhì)袋中,用拍擊式均質(zhì)器連續(xù)均質(zhì)1min~2min,液體樣品振蕩混勻即可。于41.5℃±1℃,厭氧培養(yǎng)16h~20h。

    2. 分離:取增菌后的志賀氏增菌液分別劃線接種于XLD瓊脂平板和MAC瓊脂平板或志賀氏菌顯色培養(yǎng)基平板上,于36℃±1℃培養(yǎng)20h~24h,觀察各個(gè)平板上生長的菌落形態(tài)。宋內(nèi)氏志賀氏菌的單個(gè)菌落直徑大于其他志賀氏菌。若出現(xiàn)的菌落不典型或菌落較小不易觀察,則繼續(xù)培養(yǎng)至48h再進(jìn)行觀察。

    3. 初步生化試驗(yàn):自選擇性瓊脂平板上分別挑取2個(gè)以上典型或可疑菌落,分別接種TSI、半固體和營養(yǎng)瓊脂斜面各一管,置36℃±1℃培養(yǎng)20h~24h,分別觀察結(jié)果。凡是三糖鐵瓊脂中斜面產(chǎn)堿、底層產(chǎn)酸(發(fā)酵葡萄糖,不發(fā)酵乳糖、蔗糖)、不產(chǎn)氣(福氏志賀氏菌6型可產(chǎn)生少量氣體)、不產(chǎn)硫化氫、半固體管中無動力的菌株,挑取其已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔,進(jìn)行生化試驗(yàn)和血清學(xué)分型。

    4. 生化試驗(yàn)及附加生化試驗(yàn):

    5. 生化試驗(yàn):用已培養(yǎng)的營養(yǎng)瓊脂斜面上生長的菌苔,進(jìn)行β-半乳糖苷酶、尿素、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶以及水楊苷和七葉苷的分解試驗(yàn)。除宋內(nèi)氏志賀氏菌、鮑氏志賀氏菌13型的鳥氨酸陽性;宋內(nèi)氏菌和痢疾志賀氏菌1型,鮑氏志賀氏菌13型的β-半乳糖苷酶為陽性以外,其余生化試驗(yàn)志賀氏菌屬的培養(yǎng)物均為陰性結(jié)果。另外由于福氏志賀氏菌6型的生化特性和痢疾志賀氏菌或鮑氏志賀氏菌相似,必要時(shí)還需加做靛基質(zhì)、甘露醇、棉子糖、甘油試驗(yàn),也可做革蘭氏染色檢查和氧化酶試驗(yàn),應(yīng)為氧化酶陰性的革蘭氏陰性桿菌。生化反應(yīng)不符合的菌株,即使能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集,仍不得判定為志賀氏菌屬。

    6. 附加生化試驗(yàn):由于某些不活潑的大腸埃希氏菌、A-D(堿性-異型)菌的部分生化特征與志賀氏菌相似,并能與某種志賀氏菌分型血清發(fā)生凝集,因此前面生化實(shí)驗(yàn)符合志賀氏菌屬生化特性的培養(yǎng)物還需另加葡萄糖銨、西蒙氏檸檬酸鹽、粘液酸鹽試驗(yàn)(36℃培養(yǎng)24h~48h)。

    7. 血清學(xué)鑒定:

    8. 抗原的準(zhǔn)備:志賀氏菌屬沒有動力,所以沒有鞭毛抗原。志賀氏菌屬主要有菌體(O)抗原。菌體O抗原又可分為型和群的特異性抗原。一般采用1.2%~1.5%瓊脂培養(yǎng)物作為玻片凝集試驗(yàn)用的抗原。

    9. 凝集反應(yīng):在玻片上劃出2個(gè)約1cm×2cm的區(qū)域,挑取一環(huán)待測菌,各放1/2環(huán)于玻片上的每一區(qū)域上部,在其中一個(gè)區(qū)域下部加1滴抗血清,在另一區(qū)域下部加入1滴生理鹽水,作為對照。再用無菌的接種環(huán)或針分別將兩個(gè)區(qū)域內(nèi)的菌落研成乳狀液。將玻片傾斜搖動混合1min,并對著黑色背景進(jìn)行觀察,如果抗血清中出現(xiàn)凝結(jié)成塊的顆粒,而且生理鹽水中沒有發(fā)生自凝現(xiàn)象,那么凝集反應(yīng)為陽性。

    四、結(jié)果報(bào)告

    綜合以上生化試驗(yàn)和血清學(xué)鑒定的結(jié)果,報(bào)告25g(mL)樣品中檢出或未檢出志賀氏菌。


    關(guān)鍵詞

    第三方檢測機(jī)構(gòu) , 標(biāo)準(zhǔn)檢測 , 國標(biāo)檢測 , 檢測 , 檢測中心

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    一般項(xiàng)目:環(huán)境保護(hù)監(jiān)測;生態(tài)資源監(jiān)測;土地調(diào)查評估服務(wù);工程和技術(shù)研究和試驗(yàn)發(fā)展;醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;終端計(jì)量設(shè)備銷售;計(jì)量技術(shù)服務(wù);標(biāo)準(zhǔn)化服務(wù);公路水運(yùn)工程試驗(yàn)檢測服務(wù);進(jìn)出口商品檢驗(yàn)鑒定;環(huán)保咨詢服務(wù);環(huán)境應(yīng)急治理服務(wù)(除許可業(yè)務(wù)外,可自主依法經(jīng)營法律法規(guī)非禁止或限制的項(xiàng)目)許可項(xiàng)目:檢驗(yàn)檢測服務(wù);特種設(shè)備

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         安徽量科檢測技術(shù)有限公司是一家一站式檢測服務(wù)中心,為企業(yè)及個(gè)人用戶提供低成本、高效率、更便捷的檢測服務(wù)。     主要提供的服務(wù)有:環(huán)境保護(hù)監(jiān)測;生態(tài)資源監(jiān)測;土地調(diào)查評估服務(wù);工程和技術(shù)研究和試驗(yàn)發(fā)展;醫(yī)學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;自然科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;農(nóng)業(yè)科學(xué)研究和試驗(yàn)發(fā)展;終端計(jì)量設(shè)備銷售;計(jì)量技術(shù)服務(wù);標(biāo)準(zhǔn)化服務(wù);公路水運(yùn)工程試驗(yàn)檢測服務(wù);進(jìn)出口商品檢驗(yàn)鑒定;環(huán)保咨詢服務(wù);環(huán)境應(yīng)急治理服務(wù)許可項(xiàng)檢驗(yàn)檢測服務(wù);特種設(shè)備檢驗(yàn)檢測;...

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