在《消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）》中，狂犬病毒定量滅活試驗含中和劑鑒定主要遵循病毒滅活試驗和中和劑鑒定試驗的相關(guān)規(guī)定，通過細胞感染法測定消毒因子對狂犬病毒的滅活效果，并確保中和劑能有效中和消毒劑且對病毒和細胞無不良影響。以下是具體檢測流程和要點：

一、病毒滅活試驗

1. 試驗原理：用細胞感染法測定消毒因子作用前后（或?qū)φ战M與實驗組）樣本中病毒的量。以細胞病變作為判斷指標，確定各組病毒的感染滴度，觀察消毒因子對病毒的滅活效果。

2. 試驗分組：

3. 試驗組：根據(jù)所測消毒劑對其他微生物的殺滅或滅活劑量估計，設(shè)定適宜的濃度與作用時間組（不少于1個濃度，3個作用時間），對作用時間的設(shè)計應(yīng)不短于30s。

4. 陽性對照組：用去離子水代替消毒劑，按試驗組規(guī)定步驟加入病毒懸液進行試驗和培養(yǎng)，觀察病毒生長是否良好。

5. 操作步驟：

6. 病毒懸液的制備：取出低溫保存的狂犬病毒，室溫解凍后，與設(shè)定濃度的有機干擾物混合作為消毒劑滅活試驗用病毒懸液。

7. 消毒試驗：取病毒懸液加入待檢消毒劑，立即混勻并記時。作用至規(guī)定時間，立即取出部分樣液，加入經(jīng)鑒定合格的中和劑中混勻；或用經(jīng)鑒定合格的除藥方法處理。

8. 對照組試驗：陽性對照組為病毒對照組，觀察病毒生長是否良好，病毒滴度是否達到試驗要求；陰性對照組用細胞維持液作為陰性對照，觀察有無污染，細胞生長是否良好。

9. 病毒滴度測定：以上各組按照終點稀釋法分別進行病毒滴度測定。試驗重復(fù)3次。

10. 結(jié)果評價：懸液滅活試驗中，每次試驗對病毒應(yīng)有效滅活，陽性對照組病毒滴度對數(shù)值應(yīng)達到一定要求（如≥5.0）。

二、中和劑鑒定試驗

1. 試驗?zāi)康模捍_定所選中和劑是否適用于擬進行的細胞感染法病毒滅活試驗。

2. 試驗設(shè)計原則：

3. 通過所設(shè)各組試驗結(jié)果綜合分析，確定所用中和劑是否對測試消毒劑有良好的中和作用，對試驗用病毒和細胞株是否有害或不良影響。

4. 中和試驗用消毒劑濃度應(yīng)為正式消毒試驗Zui高濃度，作用時間Zui短不得少于30s。試驗重復(fù)3次。

5. 試驗分組：

6. 中和劑+病毒懸液→接種細胞培養(yǎng)：觀察中和劑對病毒有無抑制作用。

7. （消毒劑+中和劑）+病毒懸液→接種細胞培養(yǎng)：觀察中和產(chǎn)物或未被完全中和的殘留消毒劑對病毒有無抑制作用或?qū)z測方法有無干擾。

8. 病毒懸液→接種細胞培養(yǎng)：觀察病毒是否可正常生長，并將其結(jié)果作為陽性對照值。

9. 未接種病毒的細胞→培養(yǎng)：觀察細胞生長是否正常。

10. 中和劑+細胞→培養(yǎng)：觀察所用中和劑對細胞的生長有無影響。

11. （消毒劑+中和劑）+細胞→培養(yǎng)：觀察中和產(chǎn)物溶液對細胞生長有無影響。

12. 消毒劑+細胞→培養(yǎng)：觀察消毒劑對細胞生長有無影響。

13. 預(yù)備試驗分組：

14. 正式試驗分組：

15. 結(jié)果評價：試驗結(jié)果符合以下全部條件，所測中和劑可判為合格：

16. 正式試驗中特定組無試驗病毒或僅有少量試驗病毒生長。

17. 正式試驗中特定組有較其他組顯著為多，但較其他組顯著為少的試驗病毒生長。

18. 正式試驗中特定組病毒生長與原接種量相近。

19. 正式試驗中細胞生長正常組細胞生長正常。

20. 預(yù)備試驗結(jié)果顯示，中和劑和中和產(chǎn)物在正式試驗的Zui高濃度下對細胞生長無影響。

21. 連續(xù)3次試驗取得合格評價。