在《消毒技術規(guī)范（2002年版）》2.1.1.12中，有機物對殺菌效果影響的測定旨在評估有機物存在時消毒劑對微生物的殺滅能力，為制定消毒劑的實用劑量提供參考，其核心要求與操作程序如下：

一、試驗目的

了解有機物對消毒劑殺菌作用的影響規(guī)律，為制定消毒劑的實用劑量提供參考。

二、試驗器材

1. 菌片與菌懸液：按規(guī)范要求和方法制備。

2. 有機物：根據消毒劑的使用對象選擇，如酵母粉、血清、蛋白胨等。

3. 中和劑：經中和劑試驗鑒定合格。

4. 其他器材：包括恒溫水浴箱、冷水浴裝置（可放入試管架的容器，以冰水調節(jié)水溫）、溫度計、pH計、（用無菌蒸餾水配制）等。

三、試驗微生物的選擇

根據所測消毒劑鑒定需要決定。一般情況下，除需用于特定微生物者外，對細菌繁殖體應選擇大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，作為革蘭陽性與陰性細菌的代表即可；用作滅菌劑，可使用枯草桿菌黑色變種芽孢。

四、消毒液濃度和作用時間的設定

各種因素影響的測定，均用殺滅相應微生物試驗所得Zui低有效濃度，和3個~4個作用時間進行殺滅試驗。在3個~4個作用時間中，以該Zui低有效濃度所需的Zui短有效時間為第1時間（T），其后的第2時間為第1時間的一倍（2T）。依此，第3時間為3T，第4時間為4T。試驗結果應根據需要測出殺滅對數值達5.00（消毒用）的Zui低有效劑量。必要時，可根據需要調整消毒劑濃度或作用時間。若第1時間較長（>30min），可根據情況適當縮短作用時間的組距。對第1時間較短者（<5min），可根據情況適當延長作用時間的組距。

五、試驗方法

1. 含有機物菌懸液的配制：

2. 以小牛血清為有機物代表，應設置無小牛血清對照組；含25%小牛血清組；含50%小牛血清組等3組。

3. 以稀釋液配制的微生物懸液與無菌小牛血清，按1:1與3:1比例混合，分別配成含50%與25%小牛血清的微生物懸液。此含小牛血清的微生物懸液，可用于懸液定量殺菌試驗，亦可滴染菌片進行載體定量試驗。

4. 其他有機物按此設計類推。

5. 試驗操作：

6. 各組試驗應重復3次。

7. 根據需要，選擇懸液定量殺滅試驗或載體浸泡定量殺滅試驗之一進行測定即可。

8. 具體試驗程序根據微生物種類可分別參見相關規(guī)范條款。

9. 結果計算：

10. 按相應微生物殺滅試驗計算殺滅對數值。

六、結果評價

1. 無影響：該組第1個~4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果均合格。

2. 輕度影響：該組第2個~4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果合格。

3. 中度影響：該組第3個~4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果合格。

4. 重度影響：該組只第4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果合格。

5. 嚴重影響：全部試驗對所試微生物殺滅效果均不合格。為取得消毒或滅菌的有效劑量，需增加消毒液濃度或作用時間，重新進行試驗。

七、注意事項

1. 非觀察因素穩(wěn)定：在觀察有機物的影響時，除有機物濃度根據需要改變外，其他如溫度和pH等因素均應先后一致。

2. 消毒劑選擇：不同消毒劑受有機物影響的程度不同。例如，含氯消毒劑、季銨鹽類、汞類、過氧化物類消毒劑的消毒作用明顯受有機物影響；而烷基化消毒劑（如環(huán)氧乙烷、戊二醛及碘和碘伏）受有機物的影響較小。