在《消毒技術規(guī)范（2002年版）》2.1.1.12中，溫度對殺菌效果影響的測定旨在評估不同溫度下消毒劑對微生物的殺滅能力，為制定消毒劑的實用劑量提供參考。其核心要求與操作程序如下：

一、試驗器材

1. 菌片與菌懸液：按規(guī)范要求和方法制備。

2. 恒溫水浴箱：用于調節(jié)和維持試驗所需的高溫環(huán)境。

3. 冷水浴裝置：可放入試管架的容器，以冰水調節(jié)水溫，用于調節(jié)和維持試驗所需的低溫環(huán)境。

4. 溫度計：用于測量試驗環(huán)境的水溫。

5. 其他器材：包括試管、吸管、培養(yǎng)基等，用于微生物的培養(yǎng)和計數(shù)。

二、試驗微生物的選擇

根據(jù)所測消毒劑鑒定需要決定。一般情況下，除需用于特定微生物者外，對細菌繁殖體應選擇大腸桿菌和金黃色葡萄球菌，作為革蘭陽性與陰性細菌的代表即可；用作滅菌劑，可使用枯草桿菌黑色變種芽孢。

三、消毒液濃度和作用時間的設定

1. 消毒液濃度：使用殺滅相應微生物試驗所得Zui低有效濃度。

2. 作用時間：設置3個~4個作用時間，以該Zui低有效濃度所需的Zui短有效時間為第1時間（T），其后的第2時間為第1時間的一倍（2T），依此類推，第3時間為3T，第4時間為4T。試驗結果應根據(jù)需要測出殺滅對數(shù)值達5.00（消毒用）的Zui低有效劑量。必要時，可根據(jù)需要調整消毒劑濃度或作用時間。若第1時間較長（>30min），可根據(jù)情況適當縮短作用時間的組距；對第1時間較短者（<5min），可根據(jù)情況適當延長作用時間的組距。

四、試驗方法

1. 溫度設置：設置10℃±1℃、20℃±1℃、30℃±1℃等溫度組，以10℃為間隔。也可根據(jù)實際需要設置其他溫度組。

2. 溫度調節(jié)：對要求試驗溫度高于室溫者，用恒溫水浴箱（電熱）調節(jié)；低于室溫者用冷水浴裝置（加適量冰水）調節(jié)。當上述溫度調節(jié)裝置到達要求溫度后，放入裝有試驗樣液的試管，同時放入一含與試驗樣液等量蒸餾水并插有溫度計的試管，待試管內溫度計指示到達試驗所需溫度時，開始隨后的試驗。

3. 殺菌試驗：根據(jù)需要，選擇懸液定量殺滅試驗或載體浸泡定量殺滅試驗之一進行測定即可。具體試驗程序根據(jù)微生物種類可分別參見相關規(guī)范條款。

4. 試驗重復：各組試驗應重復3次，以減少誤差。

五、結果評價

1. 無影響：該組第1個~4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果均合格，判為溫度對該消毒劑殺菌效果影響不明顯。

2. 輕度影響：該組第2個~4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果合格，判為溫度對該消毒劑殺菌效果有輕度影響。

3. 中度影響：該組第3個~4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果合格，判為溫度對該消毒劑殺菌效果有中度影響。

4. 重度影響：該組只第4個作用時間的試驗，對所試微生物殺滅效果合格，判為溫度對該消毒劑殺菌效果有重度影響。

5. 嚴重影響：全部試驗對所試微生物殺滅效果均不合格，判為溫度對該消毒劑殺菌效果有嚴重影響。為取得消毒或滅菌的有效劑量，需增加消毒液濃度或作用時間，重新進行試驗。

六、注意事項

1. 非觀察因素穩(wěn)定：在觀察溫度的影響時，除溫度根據(jù)需要改變外，其他如pH和有機物濃度等因素均應先后一致。

2. 測量：使用準確的測量設備和方法，以獲得準確的試驗數(shù)據(jù)。