王國榮 石上梅 張慶生

(中國藥品生物制品檢定所  北京100050)

世界衛(wèi)生組織藥品標(biāo)準(zhǔn)專家委員會于1975年提出了“有關(guān)化學(xué)對照品建立、保存及分發(fā)的指導(dǎo)原則”?！爸笇?dǎo)原則”是由世界衛(wèi)生組織化學(xué)對照品合作中心(瑞典)起草，該中心負(fù)責(zé)提供國際化學(xué)對照品(icrs)，這些icrs主要用于國際藥典。提出“指導(dǎo)原則”的目的是為了促使不同國家和地區(qū)負(fù)責(zé)化學(xué)對照品的相關(guān)機(jī)構(gòu)進(jìn)行相互合作并協(xié)調(diào)一致起來。

由于下述原因，1982年對“指導(dǎo)原則”進(jìn)行了修訂：

1．為滿足不同國家和區(qū)域藥典的各自要求，需建立世界衛(wèi)生組織icrs名單之外的化學(xué)對照品；

2．icrs的及時提供也有一定的難度；

3．世界衛(wèi)生組織化學(xué)對照品合作中心(瑞典)建立icrs這一工作需要由各個國家和區(qū)域的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，“指導(dǎo)原則”可以確保各實(shí)驗(yàn)室所做工作的完整、一致；

4．以適應(yīng)藥品及分析方法的變化與進(jìn)步。

采用化學(xué)對照品(crs)，其目的是為了按藥典及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求，獲得準(zhǔn)確的、可重現(xiàn)的分析結(jié)果。這些crs通常是由國家或地區(qū)藥品管理機(jī)構(gòu)指定的實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行制備和發(fā)放的；“指導(dǎo)原則”認(rèn)為，不管是在鑒別試驗(yàn)還是純度檢查，亦或是藥品的含量測定，crs的使用都應(yīng)視為相應(yīng)實(shí)驗(yàn)整體的一部分。

crs的建立須依據(jù)分析結(jié)果及其評價報告，這些報告通常應(yīng)由藥品管理當(dāng)局審查批準(zhǔn)。通常每一種crs的建立都有其特殊分析目的，由發(fā)放單位規(guī)定；如果被用作它途，則由使用者自己負(fù)責(zé)。每個crs的說明書要包括使用注意。

crs的制備應(yīng)當(dāng)遵從質(zhì)量保證體系的要求，包括生產(chǎn)管理規(guī)范(gmp)和實(shí)驗(yàn)室管理規(guī)范(glp)。

目前，該“指導(dǎo)原則”適用于一級化學(xué)對照品及二級化學(xué)對照品。一級化學(xué)對照品是指在特定的背景下具有適宜的質(zhì)量、其量值無需再與另外的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行比對的crs(a designated primary chemical reference substance is one that is widely acknowledged to have the appropriate within a specified context，and whose value is accepted with out re comparison to another chemical substance)。

二級化學(xué)對照品是指經(jīng)與一級化學(xué)對照品對照而得來的crs。對二級化學(xué)對照品進(jìn)行確證的范圍及檢測的程度要小于一級化學(xué)對照品。除其它因素外。也可將其稱為“工作標(biāo)準(zhǔn)品”（a secondary chemical reference substance is a substance whose characteristics are assigned and/or calibrated by comparison with a primary chemical reference substance．the extent of characterization and testing of a secondary chemical reference substance may be less than a primary chemical substance．this definition may apply inter alia to some substances termed“working standards”)。

1  一級化學(xué)對照品指導(dǎo)原則

1．1 對于建立crs必要性的評估

crs的制備、標(biāo)化、保存、分發(fā)是一項(xiàng)費(fèi)時費(fèi)力的工作，因此在建立某一種crs前，首先應(yīng)對其必要性進(jìn)行評價。目前在藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中要求使用crs的方法有：紅外分光光度法：鑒別/定量；紫外分光光度法：定量；儀器或目視比色法：定量(可見光)；色譜法：鑒別/定量；采用其它分離技術(shù)的定量法(其分離效果取決于化合物在溶劑相中的分配比，且隨時間、實(shí)驗(yàn)室不同而變化)；滴定法測定含量(采用重量而非化學(xué)計量關(guān)系的滴定)；旋光法定量；測定某些成分比例固定的樣品，如順、反異構(gòu)體等。

1．2  crs原料的選擇

在純度合適的條件下，原料可以從1批或多批產(chǎn)品生產(chǎn)過程中選出。作為crs仍需進(jìn)一步精制純化。

crs的純度要求取決于其用途。如，鑒別用crs無需很高的純度，因?yàn)樯倭侩s質(zhì)不會對測定產(chǎn)生明顯的影響。反之，含量測定用則要求高純度，通常以干燥品或無溶劑殘留計算的純度達(dá)到或超過99．5％是理想的含量測定用crs。在決定一種物質(zhì)是否適合作為crs時，首要考慮的是其中的雜質(zhì)對于采用的非特異性定量法有無影響。如果雜質(zhì)的理化特性與crs的主成分相近，則不妨礙此crs的應(yīng)用；相反，雜質(zhì)有顯著的特異性，即使痕量，也不能采用。在提供原料時，隨原料還須附以下資料：檢測方法的全部資料(coa)，包括數(shù)據(jù)的建立、采用的平行測定的數(shù)目，相關(guān)的譜圖等；貯存條件及穩(wěn)定性(溫度、濕度等)；有關(guān)吸水性研究的結(jié)果或原料的吸潮性；加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；雜質(zhì)的鑒別方法：雜質(zhì)所占的百分比；現(xiàn)行的物質(zhì)安全性數(shù)據(jù)手冊(updated material safety data sheet)中所列出的有關(guān)危害健康的資料。較為理想的方法是所發(fā)放的crs是由同一批樣品得來的。這就要求相互之間交換有關(guān)制備、來源、有效性、條件等資料。

1．3  crs的評價

某種化合物是否適合作為crs使用，是要由發(fā)放單位進(jìn)行仔細(xì)評價的，要盡可能采用不同的分析方法以獲得可靠的數(shù)據(jù)來保證該化合物可以作為crs使用。對該化合物鑒定所采用的實(shí)驗(yàn)內(nèi)容，取決于該化合物用于何種目的，由各個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室決定。

用作鑒別的crs(如紅外、色譜分析等)，如果純度允許，可以從生產(chǎn)過程中選一批質(zhì)量好的化合物作為原料，可要求供應(yīng)者做進(jìn)一步的純化。crs至少應(yīng)由一個實(shí)驗(yàn)室采用藥典或相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)中的方法進(jìn)行檢驗(yàn)。

用于檢查雜質(zhì)—相關(guān)物質(zhì)／揮發(fā)性物質(zhì)的方法較多，根據(jù)方法的不同，對crs的要求也不同，如：薄層色譜法(tlc)，純度至少90％；高效液相(hplc)或氣相(gc)色譜法，純度則要求更高。如果是首批crs，則須做相應(yīng)的化學(xué)、理化試驗(yàn)，諸如質(zhì)譜(ms)、核磁共振譜(nmr)、元素分析等。

如果采用比色法、hplc、gc或uv法進(jìn)行含量測定，對crs的要求較嚴(yán)：至少3個或以上實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行標(biāo)化；采用不同的方法不同的儀器，其中包括藥典方法；如果采用非特異性含量測定方法(如比色法或uv法)，必須采用相對吸收度或相對反應(yīng)率來檢查雜質(zhì)百分比。如果是選擇性的定量方法，重要的是測定雜質(zhì)的含量，在這種情況下，是盡可能采用適合的方法(法)來測定此crs。對于酸或堿性的樣品，采用酸堿滴定法測定較為簡單，也可采用其它化學(xué)計量反應(yīng)方法來測定；某些情況下采用相溶解度法或差熱掃描法亦可。

水分、有機(jī)溶劑殘量、無機(jī)灰分及有機(jī)成分的總含量應(yīng)達(dá)到100％。對大多數(shù)用于含量測定的crs，其含量可以實(shí)測值來表示。如以非特異性方法檢查crs，須測定水分、有機(jī)溶劑殘留量；對于選擇性的定量方法，除上述2項(xiàng)外，還須測定雜質(zhì)含量。

當(dāng)某種crs用作校準(zhǔn)物質(zhì)時，對其鑒定方法與含量測定用crs相似。需幾個實(shí)驗(yàn)室采用不同方法不同儀器測定其純度是否合適。當(dāng)確定此化合物適宜作為crs用時，須采用適當(dāng)?shù)膬x器給出恰當(dāng)?shù)臄?shù)值。

1．4  用于評價crs的物理化學(xué)方法

確定某種化合物是否適宜作crs用，就要建立相應(yīng)的檢測方法。所用的方法分為2類：鑒別方法和測定純度的方法。就大多數(shù)方法而言，即或沒有鑒別出雜質(zhì)，此化合物的純度也不能以數(shù)值表示，實(shí)驗(yàn)報告給出的數(shù)值是基于不同實(shí)驗(yàn)方法數(shù)據(jù)得出的近似值。

當(dāng)鑒定某種化合物是否可以作為crs時，分子結(jié)構(gòu)已確定，則可以通過與化合物紅外譜圖的比較來確認(rèn)，但對有多種構(gòu)型存在的應(yīng)加以注意；也應(yīng)比較其它譜圖，如核磁共振、質(zhì)譜、