面對復雜的激酶-底物篩選場景,單一技術(shù)無法解決所有機理問題。譜度眾合搭建了三位一體的立體化服務(wù)矩陣,全面覆蓋了從蛋白物理相互作用捕獲、空間鄰近瞬時篩選到催化修飾位點定量的全周期需求。
1. IP-MS 蛋白互作組學解決方案(經(jīng)典物理互作篩選)
利用免疫沉淀等親和富集技術(shù),捕獲目標激酶或底物的相互作用復合體,對照進行液質(zhì)聯(lián)用質(zhì)譜檢測。產(chǎn)品包含三大核心子功能:
IP效果評估:在正式上質(zhì)譜前,基于樣品中全蛋白與誘餌蛋白的質(zhì)譜定量數(shù)據(jù),科學判斷實驗成敗與數(shù)據(jù)質(zhì)量(評估分類為理想、Warning或Error),止損優(yōu)化,大大提升實驗成功率。
互作蛋白篩選:采用嚴謹?shù)膶φ諏嶒炘O(shè)計,計算實驗組與對照組間差異倍數(shù)(Fold Change> 4 且 P值顯著),結(jié)合火山圖篩選出高可信度的候選靶標激酶或底物。
動態(tài)互作組學:針對至少2個實驗組和1個對照組進行檢測,通過校正與標準化誘餌蛋白定量信息,結(jié)合Mfuzz 聚類分析,繪制不同生理/病理理化條件下激酶-底物相互作用程度的動態(tài)變化曲線。
2. PL-MS 鄰近標記篩選解決方案(弱互作/瞬時互作篩選)
激酶催化底物往往具有瞬時性或發(fā)生于特定的空間亞細胞結(jié)構(gòu)。譜度眾合基于 BioID、TurboID等生物素連接酶及過氧化物酶系統(tǒng),推出一站式鄰近標記篩選方案:
4種靈活送樣方案:微珠送樣、細胞送樣、質(zhì)粒送樣或直接提供目標基因/蛋白名稱(從核酸克隆、基因編輯細胞系構(gòu)建到親和富集與質(zhì)譜分析由譜度眾合全面承接)。
空間精準捕捉:利用生物素標簽在細胞內(nèi)原位(保留天然表達模式)標記10~20nm臨近范圍內(nèi)的蛋白,配合鏈霉親和素強親和力,極大地避免了非變性洗脫過程中的信號損失,精準鎖定瞬時互作或膜相關(guān)激酶/底物。
3. PTM 蛋白質(zhì)翻譯后修飾(磷酸化)定量與鑒定服務(wù)(機制與位點確證)
當通過網(wǎng)絡(luò)或者互作篩選出潛在底物后,需要“實錘”修飾調(diào)控位點:
目的蛋白修飾鑒定:針對單一純化膠條、親和富集Beads或體外反應(yīng)體系,進行靶點全序列掃描,確定氨基酸序列上的具體修飾類型與位點(建議重點關(guān)注修飾不超過3種)。
定量修飾組學:基于TMT/SILAC標記法或DIA/Label-free非標記法,結(jié)合金屬離子層析或特異性Motif抗體,檢測大隊列樣本中磷酸化等位點的定量差異。系統(tǒng)默認引入常規(guī)定量蛋白質(zhì)組學背景表達數(shù)據(jù),建立雙重校正模型,區(qū)分差異是來源于“真實修飾比例變化”還是“無修飾蛋白背景豐度波動”。
4. 專項生物信息學“確權(quán)”挖掘服務(wù)
除了常規(guī)的GO/KEGG注釋氣泡圖、PPI互作網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建以及基于 Cytohubba算法(Degree、DMNC、MCC)的核心子網(wǎng)絡(luò)關(guān)鍵節(jié)點評分篩選外,譜度眾合專為激酶底物場景提供定制生信:
激酶-底物互作預測:針對磷酸化質(zhì)譜數(shù)據(jù)進行信號通路富集分析與上游調(diào)控激酶預測。
特異性磷酸化基序(Motif)深度解析。
蛋白質(zhì)組學檢測服務(wù),磷酸化修飾定量,激酶底物篩選,小分子靶點篩選,蛋白互作分析
生物科技領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)轉(zhuǎn)讓;勞務(wù)分包;實驗室試劑及耗材(不含危險品)、科研儀器設(shè)備、I、II、III類醫(yī)療器械、計算機軟件的批發(fā)兼零售;檢驗檢測服務(wù);貨物進出口、技術(shù)進出口、代理進出口(不含國家禁止或限制進出口的貨物或技術(shù))。(依法須經(jīng)審批的項目,經(jīng)相關(guān)部門審批后方可開展經(jīng)營活動)
譜度眾合是一家由武漢大學博士團隊創(chuàng)辦的科研服務(wù)企業(yè),我們專注于利用質(zhì)譜技術(shù)服務(wù)于生物標志物、藥物靶點篩選、基礎(chǔ)研究等蛋白質(zhì)研究領(lǐng)域,我們在本專業(yè)細分領(lǐng)域持續(xù)深耕十幾年,針對具體研究場景開發(fā)多種面向具體研究目的和需求的服務(wù)產(chǎn)品,助力于客戶更輕松更高效的完成科研目標。...