在《消毒技術(shù)規(guī)范（2002年版）》中，嗜熱脂肪桿菌芽孢殺滅試驗(yàn)是用于評(píng)價(jià)消毒設(shè)備或消毒劑對熱抗力較強(qiáng)的微生物殺滅效果的重要方法，其核心要點(diǎn)如下：

一、試驗(yàn)?zāi)康?/h3>

驗(yàn)證消毒設(shè)備（如壓力蒸汽滅菌器）或消毒劑對嗜熱脂肪桿菌芽孢的殺滅效果，確保消毒過程達(dá)到滅菌要求。嗜熱脂肪桿菌芽孢因其對熱的強(qiáng)抗性，被廣泛用作濕熱滅菌效果的指示菌。

二、試驗(yàn)原理

嗜熱脂肪桿菌芽孢對熱有較強(qiáng)的抗性，其耐熱能力與一些病原微生物的芽孢相似。通過檢測滅菌處理后芽孢的存活情況，可間接判斷滅菌程序是否達(dá)到殺滅病原微生物的效果。若培養(yǎng)基顏色未變化（如保持紫色）且澄清，說明芽孢已被殺死，滅菌效果良好；若顏色變化（如變?yōu)辄S色）或渾濁，說明芽孢未被殺滅，滅菌效果不合格。

三、試驗(yàn)方法

1. 指示劑準(zhǔn)備

2. 使用嗜熱脂肪桿菌芽孢菌片（如ATCC7953），其抗力指標(biāo)需符合規(guī)范要求：在121℃±0.5℃條件下，存活時(shí)間≥3.9分鐘，殺滅時(shí)間≤19分鐘，D值（殺滅90%微生物所需時(shí)間）為1.3~1.9分鐘。

3. 菌片可制成自含式生物指示物（含培養(yǎng)基和芽孢）或單獨(dú)菌片（需配合外部培養(yǎng)基使用）。

4. 試驗(yàn)包制備

5. 下排氣壓力蒸汽滅菌器：標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包由3件平紋長袖手術(shù)衣、4塊小手術(shù)巾、2塊中手術(shù)巾、1塊大毛巾、30塊10cm×10cm8層紗布敷料包裹成25cm×30cm×30cm大小。

6. 預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器：標(biāo)準(zhǔn)測試包由16條全棉手術(shù)巾（每條41cm×66cm）折疊成23cm×23cm×15cm大小。

7. 標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包：將菌片裝入滅菌小紙袋，置于標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包中心部位。

8. 放置位置：將標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)包置于滅菌器排氣口上方或Zui難滅菌部位（如滅菌柜室下層前、中、后和上層、中層的中央點(diǎn)）。

9. 滅菌處理

10. 按預(yù)定滅菌程序（如121℃、20分鐘）進(jìn)行滅菌處理。

11. 對于過氧化氫蒸汽滅菌等低溫滅菌方法，需根據(jù)設(shè)備說明書調(diào)整參數(shù)（如過氧化氫濃度、作用時(shí)間）。

12. 培養(yǎng)與觀察

13. 自含式生物指示物：滅菌后擠破內(nèi)部安瓿，使培養(yǎng)液與芽孢接觸，置于56℃±1℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48小時(shí)，觀察顏色變化。

14. 單獨(dú)菌片：滅菌后用無菌鑷子取出菌片，投入溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，56℃±1℃培養(yǎng)7天，觀察培養(yǎng)基顏色變化。

15. 對照設(shè)置：同時(shí)設(shè)陽性對照（未經(jīng)滅菌的菌片）和陰性對照（無菌培養(yǎng)基）。

四、結(jié)果判定

1. 滅菌合格標(biāo)準(zhǔn)：

2. 所有試驗(yàn)菌片接種的培養(yǎng)基均保持紫色（無嗜熱脂肪桿菌生長）。

3. 陽性對照培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色（確認(rèn)芽孢活性）。

4. 陰性對照培養(yǎng)基保持紫色（排除污染可能）。

5. 滅菌不合格標(biāo)準(zhǔn)：

6. 任何試驗(yàn)菌片接種的培養(yǎng)基變?yōu)辄S色或渾濁（芽孢存活）。

7. 需重新進(jìn)行滅菌處理并再次檢測。

五、應(yīng)用場景

1. 壓力蒸汽滅菌器驗(yàn)證：

2. 用于評(píng)價(jià)下排氣、預(yù)真空和脈動(dòng)真空壓力蒸汽滅菌器的滅菌效果。

3. 每月至少進(jìn)行一次生物監(jiān)測，新滅菌器投入使用前需連續(xù)3次檢測合格。

4. 低溫滅菌設(shè)備驗(yàn)證：

5. 如過氧化氫蒸汽滅菌器、環(huán)氧乙烷滅菌器等，需根據(jù)設(shè)備類型選擇合適的生物指示劑（如嗜熱脂肪桿菌芽孢或枯草桿菌黑色變種芽孢）。

6. 消毒劑效果評(píng)價(jià)：

7. 用于評(píng)價(jià)過氧化氫、甲醛等消毒劑的芽孢殺滅效果，需結(jié)合懸液定量法或載體定量法進(jìn)行試驗(yàn)。