堿性磷酸酶（ALP或AKP）是廣泛分布于人體肝臟、骨骼、腸、腎和胎盤等組織經(jīng)肝臟向膽外排出的一種酶。這種酶能催化核酸分子脫掉5’磷酸基團(tuán)，從而使DNA或RNA片段的5’-P末端轉(zhuǎn)換成5’-OH末端。但它不是單一的酶，而是一組同工酶。已發(fā)現(xiàn)有AKP1、AKP2、AKP3、AKP4、AKP5與AKP6六種同功酶。其中第1、2、6種均來自肝臟，第3種來自骨細(xì)胞，第4種產(chǎn)生于胎盤及癌細(xì)胞，而第5種則來自小腸絨毛上皮與成纖維細(xì)胞。

關(guān)于堿性磷酸酶，北京清析技術(shù)研究院可提供活性檢測(cè)，波長(zhǎng)檢測(cè)，基因檢測(cè)，效價(jià)檢測(cè)，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，表達(dá)水平檢測(cè)，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)，半定量檢測(cè)等檢測(cè)項(xiàng)目。同時(shí)，北京清析技術(shù)研究院可對(duì)血液堿性磷酸酶，骨源堿性磷酸酶，小鼠組織內(nèi)源堿性磷酸酶，血清堿性磷酸酶，土壤堿性磷酸酶，豬肝堿性磷酸酶，細(xì)胞堿性磷酸酶等進(jìn)行檢測(cè)。

檢測(cè)方法

1、Gomori鈣鈷法

ALP在pH值9.4的環(huán)境下，以鎂離子作為激活劑，能夠把β-甘油磷酸鈉水解出磷酸，磷酸與高濃度的鈣鹽結(jié)合形成無色的磷酸鈣，再與硝酸鈷作用形成磷酸鈷，經(jīng)硫化胺處理形成黑色的硫化鈷沉淀在酶活性處。步驟：

（1）將無菌的玻片放入培養(yǎng)皿中，傳代時(shí)加入適量的細(xì)胞懸液，作細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)滿玻片后取出。

（2）PBS沖洗后用冷丙醇固定10min，蒸餾水沖洗數(shù)次。

（3）入孵育液中，37℃孵育4-6h。自來水沖洗數(shù)次。

（4）2%硝酸鈷中浸3-5min，蒸餾水洗數(shù)次。

（5）1%的硫化銨中2min，自來水沖洗，自然干燥，封固。

結(jié)果：胞質(zhì)中陽性反應(yīng)呈現(xiàn)灰黑色顆粒或塊狀沉淀。

2、PNPP偶氮法

步驟

（1）用吸管吸掉96孔板內(nèi)的培養(yǎng)液，用PBS沖洗3遍，加入含25mmol/L二乙醇胺，1mmol/L氯化鎂和6.7mmol/LPNPP的反應(yīng)液。

（2）每孔150ul.37℃避光放置半小時(shí),然后加0.1mol/L氫氧化鈉100ul終止反應(yīng),用酶標(biāo)儀于405nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值.

（3）樣品OD值在ALP標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀取酶活性值(U/L).

ALP標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制:

取PNP0.0111克用三蒸水溶解后稀釋至250ml,此時(shí)PNP的濃度為320umol/L.依次稀釋到160umol/L，80umol/L,40umol/L,20umol/L,10umol/L和5mol/L.相當(dāng)于ALP1280U/L,640U/L,320U/L,160U/L,80U/L,40U/L和20U/L(活性值).用酶標(biāo)儀于405nm波長(zhǎng)下測(cè)定PNP的OD值.以ALP活性值作為自變量,對(duì)應(yīng)的OD值作為應(yīng)變量,求得直線回歸方程.

檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)

1、WST 351:2011 堿性磷酸酶

2、ISO 3356:2009 奶.堿性磷酸酶的測(cè)定

3、ISO 3356:2009|IDF 63:2009 奶堿性磷酸酶的測(cè)定

4、NF ISO 3356:2009 牛奶堿性磷酸酶的測(cè)定

5、NT 14.41-1983 檢驗(yàn)牛奶中的堿性磷酸酶

6、DIN 10337:1993-12牛奶中堿性磷酸酶活性的測(cè)定；酶法

7、YY/T 1234-2014堿性磷酸酶測(cè)定試劑(盒)(NPP底物-AMP緩沖液法)

8、WS/T 351-2011堿性磷酸酶（ALP）催化活性濃度測(cè)定參考方法

9、NY/T 3799-2020 生乳及其制品中堿性磷酸酶活性的測(cè)定發(fā)光法

10、T/TDSTIA 008-2019 巴氏殺菌乳中堿性磷酸酶活性的測(cè)定發(fā)光法

11、ISO/TS 4985:2023乳和乳制品堿性磷酸酶活性的測(cè)定熒光微板法