鐵蛋白是一種廣泛存在的儲鐵蛋白，具有納米尺寸的水合氧化鐵內(nèi)核和籠形結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)外殼。鐵蛋白是含20%鐵的蛋白質(zhì)。通常，存在于幾乎所有身體組織尤其是肝細(xì)胞和網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)，作為鐵儲備。微量的血清鐵蛋白反映了正常的鐵儲備。檢測血清鐵蛋白是缺鐵性貧血診斷的重要依據(jù)。

鑒定方法

1、電鏡鑒定

將鐵蛋白水溶液滴在有Formvar膜的銅網(wǎng)上用3%磷鎢酸染色3min自然干燥后電鏡下觀察可見含4個(gè)電子致密區(qū)球型蛋白分子，外被蛋白外殼直徑12nm左右，內(nèi)核7.5nm。

2、抗體和鐵蛋白的結(jié)合

戊二醛作為偶聯(lián)劑效果較好，對抗體活性影響小?？煞譃橐徊椒ê投椒?。 

戊二醛一步法：在0.9mL的0.1mol/L磷酸緩沖液（pH值7.0）中溶解15mg鐵蛋白和3mg抗體，加入0.1mL戊二醛，在37℃中放置24h，加入0.01mol/L賴氨酸中止反應(yīng)，反應(yīng)物加入0.02%NaN3防腐。

戊二醛二步法：在每毫升0.1mol/L磷酸緩沖液（pH值7.0）中溶解50~80mg鐵蛋白，加入戊二醛使其終濃度0.05%~0.15%，在37℃中放置2h后，過G-25柱，去除戊二醛，收集洗脫峰，按抗體，鐵蛋白1:5的比例，在37℃反應(yīng)12h，加入0.01mol/L賴氨酸中止反應(yīng)，反應(yīng)物加入0.02%NaN3。

3、鐵蛋白標(biāo)記抗體的純化

鐵蛋白標(biāo)記抗體后的混合液中含一些未標(biāo)記的抗體蛋白等，應(yīng)盡量去除。純化方法：將標(biāo)記的抗體復(fù)合物，在4℃的條件下加入1:3體積的飽和硫酸銨飽和度為25%，4000rpm離心15min，去上清將棕黃色標(biāo)記的鐵蛋白沉淀溶于少量0.1mol/L磷酸緩沖（pH值為7.2），過G-25柱除鹽。

4、鐵蛋白免疫電鏡標(biāo)記流程

(1)電鏡包埋后標(biāo)記樣品取材、固定、包埋和超薄切片同包埋后免疫電鏡操作流程。鐵蛋白標(biāo)記的抗體分子量較大，較適合于細(xì)胞表面抗原的定位研究。

(2)電鏡包埋前鐵蛋白標(biāo)記細(xì)胞內(nèi)抗原標(biāo)記需對組織進(jìn)行適當(dāng)處理，以增強(qiáng)其通透性。多用包埋前間接染色法。孵育均在濕盒內(nèi)進(jìn)行。

操作程序如下：①將組織標(biāo)本制成10~15m厚片。

②切片漂洗后，1%BSA孵育，室溫30min。

③特異性抗體（第 一抗體）中室溫60min或4℃孵育過夜。

④PB充分漂洗3次，每次5min。

⑤鐵蛋白標(biāo)記的第二抗體孵育，室溫30min。

⑥漂洗同上，再經(jīng)戊二醛固定1h。漂洗后，1%鋨 酸后固定2h。其他步驟同常規(guī)電鏡。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

1、YY/T 1456-2016 鐵蛋白定量檢測試劑(盒)

2、T/CIFST 006-2021 食品中乳鐵蛋白的測定酶聯(lián)免疫吸附法

3、GB 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品營養(yǎng)強(qiáng)化劑乳鐵蛋白

4、T/TDSTIA 006-2019 奶及奶制品中乳鐵蛋白的測定液相色譜法

5、GB 5009.299-2024 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)食品中乳鐵蛋白的測定

6、NY/T 4439-2023 奶及奶制品中乳鐵蛋白的測定高效液相色譜法

7、WS/T 404.9-2018 臨床常用生化檢驗(yàn)項(xiàng)目參考區(qū)間第9部分：血清C-反應(yīng)蛋白、前白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白、β2-微球蛋白

8、GOST 33600-2015 乳和乳制品.采用高效液相色譜法測定乳鐵蛋白的方法

9、T/CCAA 70-2023牛乳基嬰兒配方奶粉中乳鐵蛋白含量的測定液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法

以上就是關(guān)于鐵蛋白檢測的介紹，北京清析技術(shù)研究院提供分析、檢測、測試、鑒定、研發(fā)等技術(shù)服務(wù)，已獲得CMA、CNAS等資質(zhì)證書?？傇何挥诒本?，在上海、廣州、深圳、合肥、南京、成都、武漢等地區(qū)設(shè)立27家分院，工程師一對一咨詢，寄樣或上門任您選擇，為您提供便利的檢測服務(wù)。