免疫組織化學(xué)是一項(xiàng)在醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)與臨床科研中被廣泛應(yīng)用的一項(xiàng)技術(shù)，免疫組化染色服務(wù)也是生物公司的一項(xiàng)常規(guī)服務(wù)之一。該技術(shù)融合了抗原和抗體特異性結(jié)合的免疫學(xué)技術(shù)與組織學(xué)技術(shù)，通過(guò)化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體的顯色劑顯色，來(lái)對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)抗原進(jìn)行定位和定量研究。肽類、激素、神經(jīng)遞質(zhì)、細(xì)胞因子、受體、表面抗原等，它們的組織細(xì)胞內(nèi)具有抗原性的物質(zhì)，所以均可以用免疫組織化學(xué)方法顯示。免疫組化常用的顯色劑包括熒光素、酶、生物素和鐵蛋白等。

免疫組化染色和Western印跡分析、ELISA技術(shù)是免疫學(xué)研究的3大工具，分別用于定位、定性和定量研究。免疫組織化學(xué)把免疫反應(yīng)的特異性、組織化學(xué)的可見(jiàn)性巧妙地結(jié)合起來(lái)，借助顯微鏡的顯像和放大作用，在細(xì)胞、亞細(xì)胞水平檢測(cè)各種抗原物質(zhì)，并可在原位顯示相應(yīng)的基因和基因表達(dá)產(chǎn)物。收集整理網(wǎng)絡(luò)上的資料，歸納一下免疫組化染色常用于的標(biāo)記物。

1、異硫氰酸熒光素（FITC）

FITC性質(zhì)穩(wěn)定，易溶于水和乙醇，能與蛋白質(zhì)結(jié)合，是檢測(cè)組織細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)較為常用的熒光探針。它還能標(biāo)記抗體，可用于免疫組織化學(xué)單染或多重染色，其缺點(diǎn)是在光照下容易淬滅，易受自發(fā)熒光影響。Zui大激發(fā)光波長(zhǎng)為490nm；Zui大發(fā)射光波長(zhǎng)為525nm，呈現(xiàn)黃綠色熒光。免疫組化染色是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究中經(jīng)常要使用的研究方法。美迪西提供免疫組化染色服務(wù)，其生物部在體外生物學(xué)領(lǐng)域有豐富廣泛的經(jīng)驗(yàn)，通過(guò)酶水平測(cè)定、細(xì)胞水平測(cè)定、細(xì)胞生物學(xué)、生物化學(xué)、體外同位素測(cè)定、穩(wěn)定細(xì)胞株建立、基因敲除、RNAi和MicroRNA技術(shù)等，提供一套完整的生物學(xué)服務(wù)。

2、四乙基羅丹明（RB200）

RB200能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，不溶于水，易溶于乙醇和丙酮，性質(zhì)穩(wěn)定，可長(zhǎng)期保存，廣泛應(yīng)用于雙標(biāo)記示蹤染色。Zui大激發(fā)光波長(zhǎng)為570nm，Zui大發(fā)射光波長(zhǎng)為595-600nm，熒光顯微鏡下發(fā)橙紅色熒光。

3、四甲基異硫氰酸羅丹明(TRITC)：

該熒光素能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合，比FITC穩(wěn)定性好，在生理?xiàng)l件下對(duì)pH值變化不敏感，熒光強(qiáng)度受自發(fā)熒光干擾小。Zui大激發(fā)光波長(zhǎng)為550nm；Zui大發(fā)射光波長(zhǎng)為620nm，呈橙紅色熒光，與FITC發(fā)出的黃綠色熒光對(duì)比鮮明，常用于免疫熒光組織化學(xué)雙重染色。

4、花青類染料

常用的有Cy3、Cy5等，能與細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)結(jié)合。這類染料的熒光特性與傳統(tǒng)熒光素類似，但水溶性和對(duì)光穩(wěn)定性較強(qiáng)，熒光量子產(chǎn)率較高，對(duì)pH等環(huán)境不敏感。常用于多重染色。

5、乙酸甲酯

其本身不發(fā)熒光，但透膜進(jìn)入細(xì)胞質(zhì)后，在酯酶的作用下轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂袩晒馓匦缘囊宜峒柞?。其激發(fā)光譜有pH依賴性，是使用Zui多的細(xì)胞內(nèi)pH熒光指示劑。Zui大激發(fā)光波長(zhǎng)為505nm，Zui大發(fā)射光波長(zhǎng)為530nm，呈綠色熒光。

6、Indo-1

Indo-1是典型的雙發(fā)射熒光探針，無(wú)鈣時(shí)在485nm左右有發(fā)射峰，結(jié)合鈣后，則在405nm處有發(fā)射峰，兩者的比值與細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度成線性關(guān)系，將此比值與標(biāo)準(zhǔn)曲線相比即可得出細(xì)胞內(nèi)游離鈣濃度，因此，可利用此探針定量檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度。

7、量子點(diǎn)( dot)

量子點(diǎn)是近年來(lái)研制的一種新型熒光染料，又稱半導(dǎo)體納米晶體，是由幾百或幾千個(gè)納米級(jí)顆粒構(gòu)成的半導(dǎo)體材料，性質(zhì)穩(wěn)定，溶于水，細(xì)胞本身不能合成和組裝。量子點(diǎn)具有熒光時(shí)間長(zhǎng)、產(chǎn)生多種顏色、檢測(cè)方便和應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。

8、辣根過(guò)氧化物酶

辣根過(guò)氧化物酶是一種糖蛋白，由于在辣根中該酶的含量很高，故得名。它以鐵卟啉為輔基，在過(guò)氧化氫存在時(shí)能催化苯酚、苯胺及其取代物聚合。通常用做光學(xué)和電子顯微鏡的組織化學(xué)示蹤物。該酶比活性高，穩(wěn)定，分子量小，純酶容易制備，所以較為常用，不但可以用于免疫組化染色，也廣泛運(yùn)用于免疫類（ELISA）試劑盒。過(guò)氧化物酶作為多個(gè)試劑盒顯色體系的關(guān)鍵成分，對(duì)試劑盒的質(zhì)量有重要影響。

9、堿性磷酸酶

堿性磷酸酶（AKP），又稱堿性磷酸單酯酶，是酶組織化學(xué)中Zui常用的酶之一。分布廣泛，常見(jiàn)于活躍運(yùn)輸?shù)哪ど?。該酶在堿性環(huán)境下能催化各種醇和酚的磷酸酯水解，Zui適pH為9.2-9.4，可被Mg2+、Mn2+和某些氨基酸所激活；氰化物、碘液、砷酸鹽等可抑制其活性。顯示AKP的方法很多，主要有鈣鈷法和同時(shí)偶聯(lián)法。前者所需試劑便宜，容易購(gòu)買，操作簡(jiǎn)單，但會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性。后者方法較靈敏，而且在正常組織內(nèi)不存在萘酚，因此不會(huì)出現(xiàn)假陽(yáng)性，但所需試劑較難購(gòu)買。

10、生物素（biotin）

生物素是B族維生素之一。生物素在羧化、脫羧和轉(zhuǎn)羧化反應(yīng)中起輔酶作用。生物素是含硫水溶性維生素。廣布于動(dòng)物及植物組織，已從肝提取物和蛋黃中分離，是多種羧化酶輔基的成分。生物素標(biāo)記反應(yīng)簡(jiǎn)單、溫和且很少抑制抗體活性，生物素標(biāo)記的抗體可存放多年而不失活。能與生物素結(jié)合的二級(jí)試劑素，所需的各種標(biāo)記物均可購(gòu)置。此外，親和素和鏈霉親和素的結(jié)合背景水平非常低，結(jié)合緊密且快速，抗體很容易與經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾的活化生物素結(jié)合。生物素又可以與結(jié)合有酶、熒光染料的親和素或鏈霉親和素連接，后者已有商品試劑供應(yīng)。這樣只需將純化抗體與生物素結(jié)合，就可用各種不同的標(biāo)記物來(lái)檢測(cè)。

11、金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物

金屬離子和金屬蛋白復(fù)合物如鐵蛋白、金和汞可以作為免疫組化反應(yīng)中的標(biāo)記物。如鐵蛋白等，主要應(yīng)用于免疫電鏡。免疫金銀法的基本原理是用特異性抗體與抗原反應(yīng)，隨后用金標(biāo)記的間接抗體或SPA蛋白，再與特異性抗體結(jié)合，用乳酸銀處理，使銀顆粒沉積在金顆粒上，還原銀反應(yīng)而顯示出黑褐色。適用于石蠟切片、冰凍切片，培養(yǎng)細(xì)胞，細(xì)胞涂片和樹脂包埋的電鏡切片。這種方法敏感性高，可檢測(cè)組織中微量抗原，定位準(zhǔn)確、無(wú)擴(kuò)散現(xiàn)象且背景清洗，對(duì)比度好、方法簡(jiǎn)便。

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