耶拿C5專業(yè)顯微鏡成像系統(tǒng)

   

這款相機是Jenoptik的“Progres CCD RoutineCamera”系列中的五百萬像素的制冷型號，zui大分辨率2580*1944，像素尺寸3.4μm，位數(shù)12bit，降溫15℃，廠家聲明的特色是“Visualizeexactcolors”，即色彩還原度好。根據(jù)參數(shù)，應該是定位于明場高分辨彩色圖像的拍攝。相機外形極具個性，不同于常見相機的圓柱形或立方體。通過C接口與顯微鏡相連，通過1394a火線與計算機上的1394板卡相連，使用ProgResCapturePro軟件采集圖像。軟硬件安裝簡單快捷，一次成功。
    
安裝在倒置顯微鏡上的C5相機
一、明場圖像拍攝
    軟件啟動迅速，界面一目了然，即使不看說明書也能完成簡單的拍攝操作。如圖所示，左上角“Live”鍵預覽，“Capture”鍵拍攝，可以設置自動保存，但在非預覽狀態(tài)下不能拍攝。曝光時間可以通過鼠標滾輪控制滑動條來輕松設置，但滑動條的數(shù)值不能連續(xù)變化。
  
ProgRes CapturePro軟件的圖像采集界面
嘗試對體外培養(yǎng)的原代海馬神經元進行自動參數(shù)拍攝，結果如圖所示。自動曝光快速、準確，并且值得稱贊的是可以設置自動曝光的增益補償。這個重要的小功能在我用過的一些采集軟件上都沒有，造成一旦自動曝光不符合實際要求就只能改用手動曝光。自動白平衡準確，設置時軟件提示要將光源調到zui亮，然后降到30%亮度，似乎想要一次設置就能適應所有的亮度情況。每次拍攝完軟件總有1~2秒的停頓，但尚可接受。
 

                        自動曝光的相差圖像1
自動曝光的相差圖像2
  
               使用了取點模式的自動白平衡，顏色有所偏差

二、熒光圖像拍攝
    雖然耶拿C5不是一款針對熒光拍攝的相機，對其熒光表現(xiàn)并不期待，但仍然希望它能兼顧較強的熒光，滿足用戶多樣的需求。選擇了中等強度熒光的樣品，使用NA=1.45的油鏡成像，肉眼下熒光清晰分明。使用耶拿C5的自動曝光模式進行拍攝，結果跳出曝光時間超出范圍的警告。如下圖所示，圖片能反映出熒光的范圍和形狀，但對比度不佳，細節(jié)損失較多。使用黑平衡后，效果也沒有改善。由于預覽時圖像質量更低，熒光稍弱的視野就模糊不清，很難對焦。另外，沒有找到強度閾值調節(jié)功能。
 

  
自動曝光的熒光圖像1
  
自動曝光的熒光圖像2
  
                        對熒光圖像2使用自動黑平衡模式

三、與自用相機的對比
很遺憾這次沒有拿到同一級別的相機進行對比，而是找了個制冷的黑白CCD。希望這種跨級比較也能幫助大家從中把握耶拿C5相機的大致成像水平。自用相機像素尺寸6.45μm，12bit，制冷到-20℃，是一款針對熒光成像的相機。
      耶拿C5                            自用相機
         
右圖對比度好于左圖
       
兩張圖片細節(jié)表現(xiàn)基本*
       
曝光時間*，左圖對比右圖有所差距
                
增加C5的曝光時間，左圖的質量有所提高
       
增加C5的曝光時間，左圖也反映出了一些較弱的熒光
四、特色功能
    該軟件還有一些特色功能，如熒光通道疊加、景深擴展、時間間隔拍攝等。這里只測試了熒光疊加功能。需要預先測試出zui佳的曝光時間，填入表格，再進行拍攝和疊加。疊加時不能單獨調節(jié)每個通道，因此之前要仔細測試曝光時間。疊加效果尚佳，如圖所示。
 

   
                    GFP通道
   
                  DAPI通道
  
                    熒光疊加

五、總結
該相機在明場方面的表現(xiàn)可圈可點，軟、硬件成熟度高，方便易用，用戶體驗好，能夠完全滿足明場拍攝的需要。受限于CCD芯片，該相機的熒光表現(xiàn)很一般，但通過延長曝光時間可以滿足一定的熒光拍攝要求。適用于熒光較強的樣品，以及只需要表現(xiàn)熒光有無、或熒光形狀的實驗。例如細胞轉染效率檢測、細胞核計數(shù)、細胞活力檢測等實驗。耶拿C5是一款成熟可靠的、能夠*表現(xiàn)明場圖像的相機