鏈霉親和素-瓊脂糖凝膠FF

（Streptavidin-Berpharose FF）

1.產(chǎn)品介紹

鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF（Streptavidin-BerpharoseFF）是一種將鏈霉親和素（Streptavidin）鍵合在瓊脂糖凝膠微球上形成的親和層析分離介質(zhì)，利用生物素與鏈霉親和素配體之間的相互作用分離純化生物素或生物素化的抗原、抗體、核酸等物質(zhì)。

鏈霉親和素與生物之間的親和力很強(qiáng)，需要在變性條件下洗脫，這個特性可用于抗原與抗體的分離，如將生物素化的抗體結(jié)合在凝膠上，然后利用抗原抗體的親和特性純化無生物素化的抗原，抗原洗脫時抗體不會被洗脫。鏈霉親和素對亞氨基生物素的親和力相對較弱，可以在pH9.5-11.0結(jié)合，pH4.0時洗脫，不需要使用變性劑所以能更好的保持親和素偶聯(lián)物的活性。                   

2.規(guī)格

1ml（預(yù)裝柱）、5ml（預(yù)裝柱）、10ml（預(yù)裝柱）、20ml、100ml、500ml

3.產(chǎn)品性能

性能

指標(biāo)

基質(zhì)

6%瓊脂糖微球

配基

鏈霉親和素（Streptavidin）

配基密度

5mg/ml

載量

≥300nmol生物素/ml  

 ≥6mg生物素化蛋白/ml

粒徑

45-165μm

推薦流速/流速

15-100 /700 cm/h

耐反壓

0.3MPa

pH穩(wěn)定范圍

短時間pH2-11

長時間pH4-9

儲存緩沖液

20%乙醇

儲存溫度

4-8℃

4.純化流程

①緩沖液：

（1）純化生物素或生物素化物質(zhì)

結(jié)合緩沖液：20mM NaH2PO4、 150mM NaCl、pH7.4

洗脫緩沖液：8M鹽酸胍、pH1.5

（2）純化2-亞氨基生物素或2-亞氨基生物素標(biāo)記的物質(zhì)

結(jié)合緩沖液：50mM碳酸銨、500mM NaCl、pH10.0

洗脫緩沖液：50mM乙酸銨、500mM NaCl、pH4.0

（3）純化抗原或抗體

結(jié)合緩沖液：20mM NaH2PO4、150mM NaCl、pH7.4

洗脫緩沖液：100mM甘氨酸-鹽酸、pH3.0

注：用于生物素化的抗體純化未生物素化的抗原（或生物素化的抗原純化未生物素化的抗體）有2種方法，①可先在游離狀態(tài)下抗原與抗體結(jié)合，然后當(dāng)樣品純化即可；②也可以將生物素化的抗體（或抗原）先結(jié)合柱上，然后對應(yīng)的未生物素化的抗原（或抗體）當(dāng)樣品純化。

②樣品準(zhǔn)備：

上柱的樣品應(yīng)盡量保持與結(jié)合緩沖液一致。通常可用透析、超濾、稀釋等方法處理樣品。并且上柱前應(yīng)過0.45μm濾膜或高速離心去除不溶物。

③樣品純化：

（1）取適量的鏈霉親和素瓊脂糖凝膠FF裝入合適的層析柱中，用結(jié)合緩沖液平衡5個柱體積，建議流速為100cm/h。

（2）將準(zhǔn)備好的樣品緩慢上柱，為保證樣品與鏈霉親和素充分結(jié)合，應(yīng)控制好上樣流速，建議流速為15-50cm/h。

（3）上樣后用結(jié)合緩沖液平衡10個柱體積以上，或平衡至基線，洗去雜質(zhì)，推薦流速為100cm/h。

（4）用洗脫緩沖液洗10-20個柱體積，建議流速為100cm/h，收集的洗脫液應(yīng)立即調(diào)節(jié)pH至穩(wěn)定范圍，并根據(jù)需要置換緩沖液。

（5）洗脫目的蛋白后的柱子應(yīng)立即用中性的結(jié)合緩沖液平衡，并用20%乙醇保存柱子，或進(jìn)行下一次純化。

5.注意事項

1) 使用時保證柱子和緩沖液的溫度一致，避免柱床內(nèi)產(chǎn)生氣泡，影響純化效果。

2) 去除一些沉淀或變性物質(zhì)，建議使用下面的方法用2倍柱體積的0.1MNaOH或6M鹽酸胍或8M尿素溶液進(jìn)行清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH7.4清洗。去除一些疏水性吸附造成的非特異性吸附物質(zhì)3-4倍柱體積70%乙醇或2倍柱體積的1%TritonX-100清洗，然后立即用5倍柱體積的PBS，pH 7.4清洗。

3) 本產(chǎn)品保存條件為20%乙醇，4-8℃。

4) 2-25℃，常壓，避光運(yùn)輸。

5) 僅供科研實(shí)驗(yàn)使用。