磷酸化多肽主要指肽鏈中的Ser、Tyr和Thr殘基的側(cè)鏈羥基被修飾成酸式磷酸酯多肽。磷酸化多肽是研究蛋白質(zhì)磷酸化過(guò)程的必不可少的工具，因此研究蛋白質(zhì)及多肽的磷酸化反應(yīng)并確定成熟簡(jiǎn)便的合成路線就變得非常重要。目前為止，多肽的磷酸化修飾主要有后磷酸化法和單體法兩種合成方法。后磷酸化法是多肽序列在樹(shù)脂上合成完后，再對(duì)其中的Ser、Tyr或Thr的側(cè)鏈羥基進(jìn)行磷酸化；單體法則是將適當(dāng)保護(hù)的磷酸化氨基酸直接引入到多肽序列中，這種方法較后磷酸化法操作更為簡(jiǎn)便，已經(jīng)成為多肽磷酸化修飾的主要方法。

單體法修飾時(shí)，磷酸化的氨基酸由于側(cè)鏈修飾的較大基團(tuán)產(chǎn)生的位阻而導(dǎo)致難以與肽鏈縮合，并且之后的氨基酸引入都會(huì)比較困難，尤其在含有多個(gè)磷酸化位點(diǎn)修飾時(shí)，合成將變得異常困難，并且Zui終產(chǎn)物成分復(fù)雜，難以分離，產(chǎn)率極低。因此，當(dāng)肽鏈中多個(gè)位點(diǎn)進(jìn)行磷酸化時(shí)，可以考慮采用后磷酸化法，其合成過(guò)程主要就是在多肽合成結(jié)束之后，選擇性的脫去要標(biāo)記氨基酸的側(cè)鏈保護(hù)基，對(duì)于Tyr，Thr可以直接使用側(cè)鏈不保護(hù)的氨基酸進(jìn)行反應(yīng)。側(cè)鏈保護(hù)基在1%TFA/DCM條件下可以定量的脫除。后磷酸化時(shí)，可以采用雙芐基亞磷酰胺，四氮唑生成亞磷酰胺四唑活性中間體，連接到羥基上，然后在過(guò)氧酸條件下氧化生成磷酰基，完成反應(yīng)。

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