《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則 第10部分：蜜蜂急性毒性試驗》（GB/T31270.10-2014）是中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)之一，以下是對該標(biāo)準(zhǔn)的詳細(xì)解讀：

一、標(biāo)準(zhǔn)基礎(chǔ)信息

標(biāo)準(zhǔn)編號：GB/T 31270.10-2014

標(biāo)準(zhǔn)名稱：化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評價試驗準(zhǔn)則 第10部分：蜜蜂急性毒性試驗

發(fā)布日期：2014年10月10日

實施日期：2015年3月11日

主管部門：農(nóng)業(yè)農(nóng)村部

歸口單位：全國農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會（SAC/TC133）

提出單位：中華人民共和國農(nóng)業(yè)農(nóng)村部

二、標(biāo)準(zhǔn)核心定位與用途

核心定位：規(guī)定化學(xué)農(nóng)藥對蜜蜂（成年工蜂、幼蟲）急性毒性試驗的原理、試驗條件、操作流程、數(shù)據(jù)處理及質(zhì)量控制要求，統(tǒng)一試驗方法與判定標(biāo)準(zhǔn)。

主要用途：

為農(nóng)藥登記、環(huán)境風(fēng)險評估、安全使用閾值制定提供技術(shù)依據(jù)。

評估農(nóng)藥產(chǎn)品在正常使用條件下對蜜蜂群體可能造成的直接危害程度。

篩選低毒農(nóng)藥，減少高毒農(nóng)藥對蜜蜂種群的破壞，保障農(nóng)業(yè)生態(tài)安全。

三、標(biāo)準(zhǔn)適用范圍

適用對象：各類化學(xué)農(nóng)藥原藥、制劑（含混合制劑）。

適配場景：農(nóng)藥登記環(huán)境安全評價、農(nóng)藥生產(chǎn)企業(yè)產(chǎn)品質(zhì)量控制、第三方檢測機構(gòu)毒性驗證、監(jiān)管部門風(fēng)險篩查。

排除范圍：易揮發(fā)化學(xué)農(nóng)藥（因揮發(fā)性導(dǎo)致暴露劑量不準(zhǔn)確，無法滿足試驗精度要求）。

四、標(biāo)準(zhǔn)核心內(nèi)容

術(shù)語和定義：

蜜蜂幼蟲：指蜜蜂卵孵化后至變態(tài)化蛹前的蟲態(tài)。

成年工蜂：在蜜蜂種群繁殖期，指蜂群中具備外勤采集能力和行為的蜜蜂。

子脾：蜂群中包含大量蜂卵、不同日齡幼蟲以及蛹的巢脾。

半致死劑量（LD??）：在急性經(jīng)口試驗或急性接觸毒性試驗中，引起50%供試蜜蜂死亡的農(nóng)藥活性成分劑量。

試驗類型：

蜜蜂成年工蜂急性經(jīng)口毒性試驗：將農(nóng)藥與蔗糖溶液混合制成染毒飼料，通過飼喂方式讓蜜蜂攝入，觀察規(guī)定時間內(nèi)的死亡率。

蜜蜂成年工蜂急性接觸毒性試驗：在蜜蜂被麻醉后，將不同濃度試驗藥液點滴在受試蜜蜂的中胸背板處，待溶劑揮發(fā)后，將蜜蜂轉(zhuǎn)入試驗籠中，用不含被試物的蔗糖溶液飼喂，觀察規(guī)定時間內(nèi)的死亡率。

蜜蜂幼蟲單次暴露毒性試驗（新增核心模塊）：將農(nóng)藥混入幼蟲人工飼料，對4日齡幼蟲進(jìn)行單次投喂暴露，培育至7日齡，觀察累積死亡率。

試驗條件：

溫度：蜜蜂急性經(jīng)口和急性接觸試驗在（25±2）℃下進(jìn)行；蜜蜂幼蟲急性毒性試驗在34℃~35℃下進(jìn)行。

相對濕度：蜜蜂急性經(jīng)口和急性接觸試驗在50%~70%下進(jìn)行；蜜蜂幼蟲急性毒性試驗在95%下進(jìn)行。

光照：試驗在黑暗條件下進(jìn)行。

試劑或材料：

包括蔗糖、葡萄糖、果糖、酵母提取物、鮮蜂王漿等人工飼料成分，以及樂果等參比物。

所有試劑均為分析純，水為GB/T 6682規(guī)定的三級水。

儀器設(shè)備：

包括恒溫恒濕培養(yǎng)箱、分析天平、飼喂器、移蟲針、紫外殺菌燈、離心機等。

試驗步驟：

包括預(yù)試驗、正式試驗、限度試驗和參比物質(zhì)試驗等。

預(yù)試驗用于確定正式試驗的劑量范圍；正式試驗用于計算LD??值及其95%置信區(qū)間。

試驗數(shù)據(jù)處理：

計算校正死亡率，采用Abbott公式計算，以消除對照組自然死亡對試驗結(jié)果的影響。

估算LD??值及其95%置信區(qū)間，通常采用概率單位法或寇氏法。

質(zhì)量控制：

包括被試物含量、對照組死亡率、參比物質(zhì)試驗結(jié)果范圍、實測濃度與配制濃度的偏差、對照組幼蟲累積死亡率等質(zhì)量控制要求。

對照組死亡率應(yīng)≤10%；參比物樂果24h LD??應(yīng)在特定范圍內(nèi)。

試驗報告：

試驗報告應(yīng)至少包含受試物信息、試驗條件、詳細(xì)試驗步驟、原始數(shù)據(jù)、統(tǒng)計分析方法、LD??值及其置信區(qū)間、毒性等級判定結(jié)論以及任何觀察到的異常效應(yīng)。

五、標(biāo)準(zhǔn)實施意義

規(guī)范農(nóng)藥環(huán)境安全評價工作：通過統(tǒng)一試驗方法與判定標(biāo)準(zhǔn)，確保試驗結(jié)果的準(zhǔn)確可靠及可比性。

促進(jìn)農(nóng)藥行業(yè)綠色發(fā)展：引導(dǎo)企業(yè)研發(fā)低毒、微毒農(nóng)藥，淘汰高毒農(nóng)藥，減少對蜜蜂等非靶標(biāo)生物的危害。

保障農(nóng)業(yè)生態(tài)安全：保護(hù)傳粉昆蟲，維護(hù)農(nóng)作物授粉效率，提升農(nóng)產(chǎn)品產(chǎn)量與品質(zhì)。

推動國際接軌：與國際通用試驗準(zhǔn)則接軌，提升我國農(nóng)藥產(chǎn)品的國際競爭力。