GB/T18646-2018《動(dòng)物布魯氏菌病診斷技術(shù)》標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)主要涉及血清學(xué)和病原學(xué)診斷方法，用于檢測(cè)動(dòng)物布魯氏菌病。以下是該標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)的核心內(nèi)容：

一、血清學(xué)診斷方法

1. 虎紅平板凝集試驗(yàn)（RBT）：

2. 原理：利用布魯氏菌抗原與血清中的抗體發(fā)生凝集反應(yīng)，通過(guò)觀察凝集現(xiàn)象來(lái)判斷血清中是否存在布魯氏菌抗體。

3. 應(yīng)用：適用于動(dòng)物布魯氏菌病的初篩試驗(yàn)。

4. 試管凝集試驗(yàn)（SAT）：

5. 原理：在試管中，將布魯氏菌抗原與不同稀釋度的血清混合，通過(guò)觀察凝集現(xiàn)象來(lái)判斷血清中抗體的滴度。

6. 應(yīng)用：適用于牛種、羊種和豬種布魯氏菌病的血清學(xué)確診。該標(biāo)準(zhǔn)增加了試管凝集試驗(yàn)中的微量法，提升了檢測(cè)效率與樣本利用率。

7. 注意事項(xiàng)：不適用于犬種和綿羊附睪種布魯氏菌的檢測(cè)。豬血清易出現(xiàn)非特異性反應(yīng)，診斷時(shí)需結(jié)合流行病學(xué)調(diào)查，必要時(shí)配合補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)或其他鑒別診斷，排除耶森氏菌交叉凝集反應(yīng)。

8. 補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：

9. 原理：利用抗原抗體復(fù)合物結(jié)合補(bǔ)體，通過(guò)檢測(cè)補(bǔ)體是否被結(jié)合來(lái)判斷血清中是否存在特異性抗體。

10. 應(yīng)用：適用于牛種、羊種和豬種布魯氏菌病的血清學(xué)確診。該標(biāo)準(zhǔn)增加了補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)中的微量法，并詳細(xì)規(guī)定了稀釋液制備、溶血素及補(bǔ)體效價(jià)測(cè)定等方法，讓檢測(cè)流程更規(guī)范、精準(zhǔn)。

11. 注意事項(xiàng)：不適用于犬種和綿羊附睪種布魯氏菌的檢測(cè)。

12. 間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（iELISA）：

13. 原理：將布魯氏菌抗原包被在酶標(biāo)板上，加入待檢血清，若血清中存在相應(yīng)抗體，就會(huì)與抗原結(jié)合，再通過(guò)酶標(biāo)記的二抗與結(jié)合的抗體反應(yīng)，Zui后通過(guò)顯色反應(yīng)來(lái)判定結(jié)果。

14. 應(yīng)用：適用于動(dòng)物布魯氏菌病的初篩試驗(yàn)。該標(biāo)準(zhǔn)引入了iELISA診斷方法，提高了檢測(cè)靈敏度。

15. 競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（cELISA）：

16. 原理：利用抗原抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的特性，將已知的抗原和酶標(biāo)記的抗體混合，加入待檢血清，若血清中存在相應(yīng)抗體，就會(huì)與酶標(biāo)記的抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原，Zui后通過(guò)顯色反應(yīng)來(lái)判定結(jié)果。

17. 應(yīng)用：適用于牛種、羊種和豬種布魯氏菌病的血清學(xué)確診。相比傳統(tǒng)血清學(xué)方法，cELISA特異性更強(qiáng)，靈敏度高，可檢測(cè)出低水平抗體。

二、病原學(xué)診斷方法

1. 涂片染色鏡檢：

2. 原理：將病料涂片，經(jīng)過(guò)染色后，在顯微鏡下觀察布魯氏菌的形態(tài)和染色特性。

3. 應(yīng)用：適用于布魯氏菌病的病原學(xué)初步診斷。

4. 分離培養(yǎng)：

5. 原理：將病料接種在適宜的培養(yǎng)基上，通過(guò)培養(yǎng)觀察布魯氏菌的生長(zhǎng)情況。

6. 應(yīng)用：適用于布魯氏菌病的病原學(xué)初步診斷。該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)范了培養(yǎng)細(xì)菌所用的培養(yǎng)基及病料采集需采集的樣本名稱。

7. 生化特性鑒定：

8. 原理：通過(guò)檢測(cè)布魯氏菌的生化特性，如糖發(fā)酵試驗(yàn)、氧化酶試驗(yàn)等，來(lái)鑒定布魯氏菌的種類。

9. 應(yīng)用：適用于布魯氏菌病的病原學(xué)確診。該標(biāo)準(zhǔn)增加了病原的生化特性鑒定方法，并規(guī)定了不同生化試驗(yàn)的培養(yǎng)基制備。

10. 因子血清試驗(yàn)鑒定：

11. 原理：利用已知的因子血清與布魯氏菌進(jìn)行反應(yīng)，通過(guò)觀察反應(yīng)現(xiàn)象來(lái)鑒定布魯氏菌的種類。

12. 應(yīng)用：適用于布魯氏菌病的病原學(xué)確診。該標(biāo)準(zhǔn)以表格形式列出單因子血清試驗(yàn)結(jié)果。

13. 噬菌體溶解試驗(yàn)鑒定：

14. 原理：利用噬菌體對(duì)布魯氏菌的特異性溶解作用，通過(guò)觀察噬菌體溶解現(xiàn)象來(lái)鑒定布魯氏菌的種類。

15. 應(yīng)用：適用于布魯氏菌病的病原學(xué)確診。該標(biāo)準(zhǔn)以表格形式列出各菌種噬菌體溶解試驗(yàn)結(jié)果。

16. PCR擴(kuò)增圖譜鑒定技術(shù)：

17. 原理：利用PCR技術(shù)擴(kuò)增布魯氏菌的特異性基因片段，通過(guò)電泳觀察擴(kuò)增條帶，來(lái)鑒定布魯氏菌的種類。

18. 應(yīng)用：適用于布魯氏菌病的病原學(xué)確診。該標(biāo)準(zhǔn)增加了布魯氏菌種的PCR擴(kuò)增圖譜鑒定技術(shù)，并規(guī)范了其8對(duì)引物序列。