有限蛋白水解質(zhì)譜技術(shù)（Limited Proteolysis MassSpectrometry，LiP-MS）是研究小分子化合物（天然產(chǎn)物、代謝物等）與蛋白質(zhì)相互作用，揭示蛋白結(jié)構(gòu)動態(tài)變化的高通量質(zhì)譜篩選技術(shù)。本公司推出LiP-MS藥物靶點篩選解決方案，包含三種研究目的場景：

技術(shù)原理

有限水解（LiP）的概念是指在生理狀態(tài)下蛋白酶對蛋白的不完全酶切。研究表明，生理狀態(tài)下折疊的蛋白具有較強(qiáng)的抗酶切能力，所以實驗中想要實現(xiàn)對蛋白的完全酶切需要先對蛋白進(jìn)行變性處理（去折疊）。而在生理狀態(tài)下，折疊蛋白的不完全酶切也需要蛋白酶識別位點的暴露，通常涉及到多達(dá)12以上氨基酸殘基肽段的構(gòu)象變化(局部展開)，這依賴于蛋白的動態(tài)變化，蛋白表面肽段的柔性變化可能會形成這種能被蛋白酶識別切割的位點。

LiP-MS利用有限水解的原理來識別小分子藥物作用的蛋白靶點。具體來講，生理狀態(tài)下蛋白的動態(tài)變化會暴露出表面肽段的酶切位點，但是小分子藥物與靶蛋白結(jié)合后，會在整體或者局部水平穩(wěn)定蛋白的結(jié)構(gòu)，這使得蛋白表面的肽段暴露和被蛋白酶酶切的可能性大大降低。

在這個理論背景下，設(shè)置藥物處理組與溶劑處理的對照組，同時以非特異性的蛋白酶進(jìn)行處理，會在藥物結(jié)合的靶蛋白上形成酶切位點（肽段）的差異，Zui后通過質(zhì)譜檢測來定量篩選出組間差異的肽段（蛋白），Zui終可以確認(rèn)為藥物作用的結(jié)合靶點。

產(chǎn)品優(yōu)勢

1. 簡單便捷：無需設(shè)計合成分子探針；提供野生型細(xì)胞/組織和藥物分子就可以進(jìn)行實驗；

2. 真實直接：使用藥物分子在體外直接進(jìn)行結(jié)合實驗，得到直接結(jié)合靶點及其結(jié)合位點；

3. 數(shù)據(jù)驅(qū)動：利用質(zhì)譜技術(shù)的高通量性能，無偏見的數(shù)據(jù)驅(qū)動篩選保障獲得真實的陽性結(jié)果，實現(xiàn)治療靶點與脫靶靶點的全覆蓋；

4. 直接結(jié)論：通過比較篩選、生信分析和數(shù)據(jù)庫挖掘，報告直接給出推薦的靶點列表清單；

5. 驗證數(shù)據(jù)：對潛在靶蛋白與藥物分子進(jìn)行分子對接，在計算機(jī)模擬層面給藥物靶點進(jìn)行驗證；

產(chǎn)品介紹

LiP-MS藥物靶點篩選

藥物靶點研究Zui常見的場景是有了一個有效的藥物，但是不清楚這個藥物作用的具體靶點和機(jī)制。這個時候可以進(jìn)行蛋白質(zhì)組水平的LiP-MS藥物靶點篩選?？蛻籼峁┰嫉募?xì)胞或組織及藥物，譜度眾合實驗室在非變性條件下提取疾病模型細(xì)胞/組織中的全部蛋白，分別使用藥物和溶劑進(jìn)行處理，隨后進(jìn)行有限水解實驗，通過質(zhì)譜高通量篩選兩組間差異肽段，實現(xiàn)在整體蛋白水平篩選藥物作用的蛋白靶點。

送樣要求：

1. 至少6個給藥前樣本（藥物處理組3個，溶劑對照組3個；如需增加不同濃度或者不同藥物處理組，每組增加3個樣本）；

2. 單個樣本起始細(xì)胞量建議>1*10E7（組織樣本＞5mg）;藥物用量：摩爾分子質(zhì)量/10（μg），例如分子量1000的藥物，需要100μg的量；或者20μL*5mM的藥物溶液。

3. 收集細(xì)胞/組織樣本時需以PBS清洗干凈，樣本不含有任何去垢劑/變性劑成分。

LiP-MS藥物-蛋白結(jié)合域分析

該產(chǎn)品應(yīng)用于一個特殊的藥物靶點研究場景：已經(jīng)明確了藥物作用的靶蛋白，但是不清楚藥物作用在蛋白上的哪個位置（區(qū)域），可以通過對重組蛋白的LiP-MS實驗來實現(xiàn)研究目的。客戶提供純化重組蛋白及藥物，譜度眾合實驗室進(jìn)行體外的重組蛋白和藥物分子結(jié)合實驗，隨后進(jìn)行有限水解實驗，通過高分辨質(zhì)譜來分析藥物作用所產(chǎn)生的差異肽段，結(jié)合分子對接可以獲得明確的藥物-蛋白結(jié)合區(qū)域信息。

送樣要求：

2. 單個樣本起始重組蛋白量建議>5μg（總量大于30μg，濃度不低于0.05μg/μL）；

3. 重組蛋白溶液中不含有任何去垢劑/變性劑成分。

LiP-MS藥物機(jī)制研究

該產(chǎn)品用于體內(nèi)/活細(xì)胞給藥條件下篩選藥物靶點，同時提供藥物進(jìn)入機(jī)體/細(xì)胞后引起的生理/病理變化（蛋白表達(dá)變化），以提供藥物作用分子機(jī)制。客戶提供經(jīng)藥物/溶劑對照處理后的細(xì)胞/組織樣本，譜度眾合實驗室分成胰蛋白酶直接處理的定量比較組和有限水解處理后的結(jié)構(gòu)比較組。通過定量比較組可以得到藥物處理下蛋白表達(dá)變化結(jié)果。結(jié)構(gòu)比較組數(shù)據(jù)經(jīng)過定量比較組校正之后得到藥物作用后蛋白結(jié)構(gòu)變化信息（肽段差異），進(jìn)而篩選藥物作用靶點蛋白。

送樣要求：

1. 至少12個給藥/溶劑處理后的樣本（藥物處理組3個，溶劑對照組3個；藥物處理有限水解組3個，溶劑對照組有限水解組3個）；

2. 單個樣本起始細(xì)胞量建議>1*10E7（組織樣本＞5mg）;

3. 收集細(xì)胞/組織樣本時需以PBS清洗干凈，樣本不含有任何去垢劑/變性劑成分。