目的：確定生物制品是否被活的微生物污染，保證生物制品的質(zhì)量和安全性，防止因微生物污染導(dǎo)致使用者感染或其他不良反應(yīng)。

適用范圍：適用于各類生物制品，包括疫苗、血液制品、細(xì)胞治療產(chǎn)品、基因治療產(chǎn)品等在生產(chǎn)、質(zhì)量控制及放行過(guò)程中的無(wú)菌檢查。

潔凈環(huán)境：無(wú)菌檢測(cè)應(yīng)在環(huán)境潔凈度不低于B級(jí)背景下的A級(jí)單向流空氣區(qū)域內(nèi)或隔離系統(tǒng)中進(jìn)行。B級(jí)背景環(huán)境能有效控制空氣中的微生物和微粒數(shù)量，而A級(jí)單向流空氣區(qū)域則能提供更高潔凈度的局部環(huán)境，確保檢測(cè)過(guò)程中不受外界微生物污染。例如，在生物制藥企業(yè)的無(wú)菌檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室中，A級(jí)單向流工作臺(tái)為檢測(cè)操作提供了一個(gè)相對(duì)獨(dú)立、高度潔凈的空間。

隔離系統(tǒng)：隔離系統(tǒng)是一種能將操作人員與檢測(cè)樣品完全隔離的設(shè)備，通過(guò)高效空氣過(guò)濾系統(tǒng)和正壓維持，防止外界微生物進(jìn)入。它具有更高的安全性和可靠性，適用于一些對(duì)無(wú)菌要求極高或操作人員可能接觸到有害微生物的檢測(cè)項(xiàng)目。

常用培養(yǎng)基

硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基：主要用于需氧菌和厭氧菌的培養(yǎng)。其成分中的硫乙醇酸鹽能還原氧化劑，維持培養(yǎng)基的還原環(huán)境，有利于厭氧菌的生長(zhǎng)；同時(shí)，培養(yǎng)基中的營(yíng)養(yǎng)成分也能滿足需氧菌的生長(zhǎng)需求。例如，在檢測(cè)含有厭氧菌潛在污染風(fēng)險(xiǎn)的生物制品時(shí)，硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基是常用的選擇。

胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基：適用于真菌和需氧菌的培養(yǎng)。它含有豐富的蛋白質(zhì)、碳水化合物等營(yíng)養(yǎng)成分，能為微生物的生長(zhǎng)提供良好的條件。

適用性檢查：每批培養(yǎng)基在使用前必須進(jìn)行適用性檢查。將規(guī)定數(shù)量的試驗(yàn)菌（如金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉等）分別接種到硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中，在規(guī)定的溫度和時(shí)間下培養(yǎng)，觀察試驗(yàn)菌的生長(zhǎng)情況。只有當(dāng)試驗(yàn)菌在相應(yīng)培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好時(shí)，該批培養(yǎng)基才可用于無(wú)菌檢測(cè)。

接種方法

直接接種法：將供試品直接接種到硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。對(duì)于一些液體生物制品，可直接吸取一定量加入到培養(yǎng)基中；對(duì)于固體或半固體供試品，需進(jìn)行適當(dāng)?shù)奶幚?，如溶解、研磨等，然后再接種。例如，對(duì)于凍干粉針劑，需先用適量的稀釋液溶解后再接種。

薄膜過(guò)濾法：適用于一些抑菌性較強(qiáng)的供試品。將供試品通過(guò)薄膜過(guò)濾器過(guò)濾，使微生物截留在濾膜上，然后將濾膜分別轉(zhuǎn)移到硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基和胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基中。這種方法可以有效去除供試品中的抑菌成分，提高微生物的檢出率。

培養(yǎng)條件：硫乙醇酸鹽流體培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為30 -35℃，胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基的培養(yǎng)溫度為20 -25℃。培養(yǎng)時(shí)間不少于14天，在培養(yǎng)期間應(yīng)定期觀察培養(yǎng)基中是否有微生物生長(zhǎng)的跡象，如渾濁、沉淀、氣泡、菌膜等。

陰性對(duì)照：陰性對(duì)照管應(yīng)無(wú)菌生長(zhǎng)，否則判定試驗(yàn)無(wú)效。陰性對(duì)照通常是不接種供試品的培養(yǎng)基，用于驗(yàn)證培養(yǎng)基、培養(yǎng)環(huán)境和操作過(guò)程是否受到污染。

陽(yáng)性對(duì)照：陽(yáng)性對(duì)照管應(yīng)有菌生長(zhǎng)，否則判定試驗(yàn)無(wú)效。陽(yáng)性對(duì)照是將已知的試驗(yàn)菌接種到培養(yǎng)基中，用于驗(yàn)證培養(yǎng)基的適用性和檢測(cè)方法的有效性。

供試品判定：若供試品管均澄清，或雖顯渾濁但經(jīng)證明并非有菌生長(zhǎng)，判供試品符合規(guī)定；若供試品管中任何一管顯渾濁并確證有菌生長(zhǎng)，判供試品不符合規(guī)定，除非能充分證明試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，即生長(zhǎng)的微生物非供試品所含。例如，如果發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基污染或操作過(guò)程中出現(xiàn)失誤導(dǎo)致微生物生長(zhǎng)，則試驗(yàn)結(jié)果無(wú)效，需要重新進(jìn)行檢測(cè)。

樣品處理：在處理供試品時(shí)，要注意避免引入外源性微生物污染。操作過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格遵守?zé)o菌操作規(guī)程，使用無(wú)菌的器具和試劑。

培養(yǎng)基保存：培養(yǎng)基應(yīng)按照規(guī)定的條件保存，避免受潮、變質(zhì)。在使用前要檢查培養(yǎng)基的外觀、pH值等指標(biāo)，確保其質(zhì)量符合要求。

人員培訓(xùn)：從事無(wú)菌檢測(cè)的人員應(yīng)經(jīng)過(guò)專業(yè)培訓(xùn)，熟悉無(wú)菌檢測(cè)的原理、方法和操作規(guī)程，具備良好的無(wú)菌操作技能和質(zhì)量意識(shí)。