單寧酶

基因工程育種具有能定向、穩(wěn)定遺傳、目的性強(qiáng)、育種周期短和能克服遠(yuǎn)緣雜交的障礙等優(yōu)點，國內(nèi)外都開展了構(gòu)建高產(chǎn)單寧酶基因工程菌的研究。HatamotoO等*了米曲霉單寧酶的基因，用3個脫氧核糖核苷酸探針按照單寧酶N-末端和內(nèi)在的氨基酸序列合成了單寧酶基因。單寧酶低產(chǎn)菌株米曲霉AO1被包含單寧酶基因的質(zhì)粒pT1轉(zhuǎn)化后，轉(zhuǎn)化株的單寧酶活力增加了，且與轉(zhuǎn)化的質(zhì)粒數(shù)成比例。陳志仕[5]  *并分析了米曲霉單寧酶基因序列，構(gòu)建了含單寧酶基因的載體，實現(xiàn)了在大腸桿菌（E.coli）和畢赤酵母（Pichiapastoris）中的表達(dá)。鄭穗蘭 [6] 改造了重組米曲霉單寧酶基因的表達(dá)質(zhì)粒，成功地進(jìn)行了基因表達(dá)框架的改造，通過轉(zhuǎn)化篩選獲得了轉(zhuǎn)化子并進(jìn)行了搖瓶表達(dá)的初步摸索。ZHONGX F 等研究了米曲霉單寧酶基因在畢赤酵母（Pichiapastoris）中的表達(dá)，酶活力比出發(fā)菌株提高了3倍。由于天然菌生產(chǎn)單寧酶主要是通過曲霉屬微生物的發(fā)酵獲得，曲霉屬發(fā)酵工藝成熟、易于大規(guī)模的培養(yǎng)、成本低廉、副產(chǎn)物少、產(chǎn)物分離簡單，人們也對利用重組曲霉表達(dá)系統(tǒng)提高單寧酶的表達(dá)進(jìn)行了嘗試。如黃小鳳等[7] 利用PCR擴(kuò)增得到米曲霉單寧酶基因的編碼序列，然后將其連接到黑曲霉的表達(dá)載體ANED2-SP2上。將構(gòu)建好的單寧酶基因表達(dá)載體通過原生質(zhì)轉(zhuǎn)化法導(dǎo)入黑曲霉菌株ST31中wu

該重組菌株的單寧酶活力Zui高為104.02U/ml，比原始天然菌株提高了2-3倍。TadashiT等將外源的DNA整合到大豆曲霉和米曲霉的染色體中，提高了在ku70 和ku80基因斷裂過程中基因的中靶頻率，為單寧酶基因的整合提供了參考價值。

單寧酶的生產(chǎn)可采用固體發(fā)酵和液體深層發(fā)酵兩種方法。雖然固體發(fā)酵的設(shè)備要求比較簡單，易于推廣，但其缺點是容易污染雜菌；而液體深層發(fā)酵比較容易控制，不易污染雜菌，而且生產(chǎn)效率高，單寧酶的研究和生產(chǎn)多采用液體深層發(fā)酵的方法。