凱氏定氮是測定化合物或混合物中總氮量的一種方法。即在有催化劑的條件下，用濃硫酸消化樣品將有機(jī)氮都轉(zhuǎn)變成無機(jī)銨鹽，然后在堿性條件下將銨鹽轉(zhuǎn)化為氨，隨水蒸氣蒸餾出來并為過量的硼酸液吸收，再以標(biāo)準(zhǔn)鹽酸滴定，就可計(jì)算出樣品中的氮量。由于蛋白質(zhì)含氮量比較恒定，可由其氮量計(jì)算蛋白質(zhì)含量，故此法是經(jīng)典的蛋白質(zhì)定量方法。

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凱氏定氮法

1）試劑

1.1 硫酸銅。 1.2 硫酸鉀。 1.3 硫酸。 1.4 1%硼酸溶液。1.5混合指示液：1份0.1%甲基紅乙醇溶液與5份0.1%溴甲酚綠乙醇溶液臨用時(shí)混合。也可用2份0.1%甲基紅乙醇溶液與1份0.1%次甲基藍(lán)乙醇溶液臨用時(shí)混合。1.6 30%氫氧化鈉溶液。 1.7 0.025mol/L硫酸標(biāo)準(zhǔn)溶液或0.05mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2）儀器

1.安全管 2.導(dǎo)管 3.汽水分離管 4.樣品入口 5.塞子 6.直形冷凝管7.吸收瓶 8.隔熱液套 9.反應(yīng)管 10.蒸汽發(fā)生瓶

3）操作

1、樣品處理：精密稱取0.2-2.0g固體樣品或2-5g半固體樣品或吸取10-20ml液體樣品（約相當(dāng)?shù)?0-40mg），移入干燥的100ml或500ml定氮瓶中，加入0.2g硫酸銅，6g硫酸鉀及20毫升硫酸，稍搖勻后于瓶口放一小漏斗，將瓶以45度角斜支于有小孔的石棉網(wǎng)上，小火加熱，待內(nèi)容物全部炭化，泡沫完全停止后，加強(qiáng)火力，并保持瓶內(nèi)液體微沸，至液體呈藍(lán)綠色澄清透明后，再繼續(xù)加熱0.5小時(shí)。取下放冷，小心加20ml水，放冷后，移入100ml容量瓶中，并用少量水洗定氮瓶，洗液并入容量瓶中，再加水至刻度，混勻備用。取與處理樣品相同量的硫酸銅、硫酸鉀、濃硫酸同一方法做試劑空白試驗(yàn)。但是此法比較危險(xiǎn)，不易在實(shí)驗(yàn)室演示，大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室有消煮儀一次可以進(jìn)行多個(gè)（一次可以消煮16個(gè)樣品）樣品處理，并有通風(fēng)櫥進(jìn)行通風(fēng)，溫度可以自己設(shè)定，更加安全和可操作性，因此逐步成為主要的凱氏定氮法的處理方法。

2、裝好定氮裝置，于水蒸氣發(fā)生器內(nèi)裝水約2/3處加甲基紅指示劑數(shù)滴及數(shù)毫升硫酸，以保持水呈酸性，加入數(shù)粒玻璃珠以防暴沸，用調(diào)壓器控制，加熱煮沸水蒸氣發(fā)生瓶內(nèi)的水。

3、向接收瓶內(nèi)加入10ml2%硼酸溶液及混合指示劑1滴，并使冷凝管的下端插入液面下，吸取10.0ml樣品消化液由小玻璃杯流入反應(yīng)室，并以10ml水洗滌小燒杯使流入反應(yīng)室內(nèi)，塞緊小玻璃杯的棒狀玻璃塞。將10ml40%氫氧化鈉溶液倒入小玻璃杯，提起玻璃塞使其緩慢流入反應(yīng)室，不能立即將玻璃蓋塞緊，這樣易使玻璃塞粘在進(jìn)樣口，應(yīng)先用蒸餾水沖洗然后再蓋，并加水于小玻璃杯以防漏氣。夾緊螺旋夾，開始蒸餾，蒸氣通入反應(yīng)室使氨通過冷凝管而進(jìn)入接收瓶內(nèi)，蒸餾5min。移動接收瓶，使冷凝管下端離開液皿，再蒸餾1min，然后用少量水沖洗冷凝管下端外部。取下接收瓶，以0.05N硫酸或0.05N鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液定至灰色或藍(lán)紫色為終點(diǎn)。

4、計(jì)算

X={[（V1-V2）*N*0.014]/（m*10）}*F*100%

X：樣品中蛋白質(zhì)的百分含量，g；V1：樣品消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)液的體積，ml； V2：試劑空白消耗硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，ml； N：硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的當(dāng)量濃度；0.014：1N硫酸或鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液1ml相當(dāng)于氮克數(shù)； m：樣品的質(zhì)量（體積），g（ml）； F：氮換算為蛋白質(zhì)的系數(shù)。

檢測標(biāo)準(zhǔn)

1、GB/T 33862-2017 全(半)自動凱氏定氮儀

1、T/QAS 071-2021 鹵水 總氮的測定 凱氏定氮法

3、KS E ISO 333-2018 煤 氮的測定半微量凱氏定氮法

4、DB64/T 1734-2020 土壤水解性氮的測定凱氏定氮儀法

5、T/NAIA 001-2020 發(fā)酵飼料中氨態(tài)氮的測定凱氏定氮法

6、T/NAIA 044-2021 家畜中尿液總氮的測定 凱氏定氮法

7、GOST 34111-2017 果汁產(chǎn)品 凱氏定氮法測定氮含量

8、KS I ISO 11261-2021 土壤質(zhì)量 全氮的測定改良凱氏定氮法

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