胰蛋白酶是從牛、豬、羊的胰臟提取，純化獲得的結(jié)晶，再制成的凍干制劑。易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇等有機(jī)溶劑。在pH1.8時(shí)，短時(shí)間煮沸幾乎不失活；在堿溶液中加熱則變性沉淀，Ca2+有保護(hù)和激活作用，胰蛋白酶的等電點(diǎn)為pH10.1。

牛胰蛋白酶原有229個(gè)氨基酸組成，含6對二硫鍵，其氨基酸排列順序和晶體結(jié)構(gòu)已被闡明。在腸激酶活自身催化下，酶原的N末端賴氨酸與異亮氨酸殘基之間的肽鍵被水解，釋放出來纈-天-天-天-天-賴6肽，生成有活性的胰蛋白酶。牛的胰蛋白酶氨基酸殘基223個(gè)，分子量23800，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。

豬胰蛋白酶的化學(xué)結(jié)構(gòu)與牛胰蛋白酶十分相似，在氨基酸殘基排列順序中，只有41個(gè)氨基酸殘基不同，但分子構(gòu)型有很大區(qū)別。沉降系數(shù)S20W為2.77S，pI=10.8，熱穩(wěn)定性較牛胰蛋白酶穩(wěn)定，Ca2+對酶的保護(hù)作用不及牛羊的明顯，無螯合Ca2+的中心部位。有6對二硫鍵，斷裂1~2個(gè)鍵，均不至于破壞酶分子的完整結(jié)構(gòu)而保護(hù)了酶的活性。酶的活力分別相當(dāng)于牛的72%及羊的61%。

胰蛋白酶專一作用有堿性氨基酸精氨酸及賴氨酸羧基所組成的肽鍵。酶本身很容易自溶，由原先的β-胰蛋白酶酶轉(zhuǎn)化為α-胰蛋白酶，再進(jìn)一步降解為擬胰蛋白酶，乃至碎片，活力也逐步下降而喪失。

關(guān)于胰蛋白酶，北京清析技術(shù)研究院可提供密度、沸點(diǎn)、折射率、熔點(diǎn)、水溶性、活性測定、含量測定、定性定量分析、外觀、抑制因子測定、性狀、生物活性、酸度、溶液澄清度、干燥失重等檢測項(xiàng)目。同時(shí)，北京清析技術(shù)研究院可對胰蛋白酶抑制劑等進(jìn)行檢測。

胰蛋白酶含量測定方法

照紫外-可見分光光度法(通則0401)測定底物溶液制成后應(yīng)在2小時(shí)內(nèi)使用。取N-苯甲酰L精氨酸乙酯鹽酸鹽85.7mg，加水溶解使成100ml，作為底物原液；取10ml，用磷酸鹽緩沖液(取0.067mol/L磷酸二氫鉀溶液13ml與0.067mol/L磷酸氫二鈉溶液87ml混合，pH值為7.6)稀釋成100ml，恒溫于25.0℃±0.5℃，以水作空白，在253mm的波長處測定吸光度，必要時(shí)可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)，使吸光度在0.575~0.585之間供試品溶液取本品適量，精密稱定，加0.001mol/L鹽酸溶液溶解并定量稀釋制成每1ml中含50~60胰蛋白酶單位的溶液。測定法取底物溶液3.0ml，加0.001mol/L鹽酸溶液200μl，混勻，作為空白。另精密量取供試品溶液2004，加底物溶液(恒溫于25.0℃±0.5℃)3.0ml，立即計(jì)時(shí)，混勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25.0℃士0.5℃，在253nm的波長處，每隔30秒讀取吸光度，共5分鐘。以吸光度為縱坐標(biāo)，時(shí)間為橫坐標(biāo)，作圖；每30秒吸光度的改變應(yīng)恒定在0.015~0.018之間，呈線性關(guān)系的時(shí)間不得少于3分鐘。若不符合上述要求，應(yīng)調(diào)整供試品溶液的濃度，再作測定。在上述吸光度對時(shí)間的關(guān)系圖中，取成直線部分的吸光度，按下式計(jì)算。P0.003TW式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量，單位；A1為直線上終止的吸光度；A2為直線上開始的吸光度；T為A1至A2讀數(shù)的時(shí)間，分鐘；W為測定液中含供試品的量，mg；0.003為在上述條件下，吸光度每分鐘改變0.003，即相當(dāng)于1個(gè)胰蛋白酶單位。

胰蛋白酶檢測標(biāo)準(zhǔn)

1、JIS K 0605:2000 蛋白質(zhì).胰蛋白酶.定量分析方法

2、JIS K 0605:1992 胰蛋白酶定量分析的方法

3、KS J 4205-2008 備用胰蛋白酶的定量分析方法

4、KS J 4205-2023 固定化胰蛋白酶的定量分析方法

5、GB/T 21498-2008大豆制品中胰蛋白酶抑制劑活性的測定

6、DIN EN ISO 14902:2022-08動物飼料-大豆產(chǎn)品胰蛋白酶抑制劑活性的測定

7、GB/T 40368-2021 植物代謝產(chǎn)物胰蛋白酶抑制因子測定酶聯(lián)免疫吸附法

8、GB 5009.224-2016 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn)大豆制品中胰蛋白酶抑制劑活性的測定

以上就是關(guān)于胰蛋白酶檢測的介紹，北京清析技術(shù)研究院提供分析、檢測、測試、鑒定、研發(fā)等技術(shù)服務(wù)，已獲得CMA、CNAS等資質(zhì)證書。總院位于北京，在上海、廣州、深圳、合肥、南京、成都、武漢等地區(qū)設(shè)立27家分院，工程師一對一咨詢，寄樣或上門任您選擇，為您提供便利的檢測服務(wù)。