預(yù)雜交

1）每個(gè)管中置換成大約300ulHYB－溶液，原位雜交，60℃水浴5分鐘，避免振蕩。

2）用等體積的HYB＋取代HYB－。

3）60℃水浴，預(yù)雜交4小時(shí)以上。

雜交

1）吸去預(yù)雜交的HYB＋，加上100ul已加入探針的HYB＋溶液（探針濃度約為1ng/ul）..

2）60℃ 溫浴過夜。

 注：雜交與預(yù)雜交的溫度可以是55到60度不等，原位雜交技術(shù)，溫度越低，探針結(jié)合越好，溫度越高，背景越小。

原位雜交法是指將特定標(biāo)記的已知順序核酸為探針與細(xì)胞或組織切片中核酸進(jìn)行雜交，從而對特定核酸順序進(jìn)行定量定位的方法。原位雜交法可以在細(xì)胞標(biāo)本或組織標(biāo)本上進(jìn)行。另有熒光原位雜交使用DNA或者RNA探針來檢測與其互補(bǔ)的另一條鏈在細(xì)菌或其他真核細(xì)胞中的位置RNA原位核酸雜交又稱RNA原位雜交組織化學(xué)或RNA原位雜交。

原位雜交技術(shù)(In situhybridization，ISH)是分子生物學(xué)、組織化學(xué)及細(xì)胞學(xué)相結(jié)合而產(chǎn)生的一門新興技術(shù)，植物組織原位雜交，始于20世紀(jì)60年代。1969年美國耶魯大學(xué)的Gall等(1969)首先用爪蟾核糖體基因探針與其卵母細(xì)胞雜交，將該基因進(jìn)行定位，與此同時(shí)Buongiorno—Nardelli和Amaldi等(1970)相繼利用同位素標(biāo)記核酸探針進(jìn)行了細(xì)胞或組織的基因定位，從而創(chuàng)造了原位雜交技術(shù)。自此以后，由于分子生物學(xué)技術(shù)的迅猛發(fā)展，特別是20世紀(jì)70年代末到80年代初，分子、質(zhì)粒和噬菌體DNA的構(gòu)建成功，為原位雜交技術(shù)的發(fā)展奠定了深厚的技術(shù)基礎(chǔ)。

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