這個(gè)軟骨藻酸（ASP）ELISA檢測方法可以很敏感的定量檢測軟骨藻酸的含量。軟骨藻酸是和健忘性貝類毒素相關(guān)的一類海藻產(chǎn)生的水溶性毒素。試劑盒用于定量或定性檢測檢測水樣和貝類樣品中軟骨藻酸的含量。貝類樣品需要進(jìn)行樣品前處理。如果需要可以用傳統(tǒng)的方法例如HPLC,GC/MS來證實(shí)。

2．安全說明

試劑盒中的標(biāo)準(zhǔn)溶液里含有少量的軟骨藻酸。底物中包含有四甲基聯(lián)苯胺，終止液中含有稀硫酸。要避免皮膚和粘膜與終止液接觸，如果不小心接觸了請馬上用水沖洗。

3．保存和穩(wěn)定性

試劑盒應(yīng)保存在2-8℃，不要冷凍。在使用之前要把試劑盒中的溶液回復(fù)到室溫（20-25℃）。有效期內(nèi)試劑盒中的試劑都可以使用。

4．原理

試劑盒的原理是直接競爭ELISA法，通過特異性抗體來識別軟骨藻酸。當(dāng)樣品中含有軟骨藻酸時(shí)，樣品中的軟骨藻酸與軟骨藻酸酶結(jié)合物競爭結(jié)合溶液中的軟骨藻酸抗體。軟骨藻酸抗體與包被在微孔板上的羊抗鼠二抗結(jié)合。經(jīng)過一步洗滌加入底物溶液，產(chǎn)生有色反應(yīng)。產(chǎn)生的綠色的顏色深度與樣品中軟骨藻酸的含量成反比。加入反應(yīng)停止液后使顏色由藍(lán)色轉(zhuǎn)變?yōu)辄S色。用酶標(biāo)儀在450nm處測定吸光度值。通過繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線來計(jì)算樣品中軟骨藻酸的含量。

5.軟骨藻酸試劑盒的局限性和可能的干擾

對在水樣中經(jīng)常出現(xiàn)的多種有機(jī)物和無機(jī)物已近作過檢測對此試劑盒并無干擾。由于化合物的易變質(zhì)性由基質(zhì)反應(yīng)引起的干擾是不可能完全避免的。操作不當(dāng)也可能導(dǎo)致檢測結(jié)果錯(cuò)誤，比如：試劑盒保存條件不對、錯(cuò)誤的加液順序、試劑的量沒有加準(zhǔn)確、孵育的時(shí)間太長或太短、孵育的溫度太高或太低。與其它檢測方法一樣對陽性結(jié)果要求通過其它傳統(tǒng)的方法來驗(yàn)證。

6．軟骨藻酸測定的重要性

軟骨藻酸及其衍生物是一類海藻產(chǎn)生的水溶性毒素，主要是大亞灣擬菱形藻等微藻類生物。大亞灣擬菱形藻水華會(huì)導(dǎo)致貝類等濾食性生物體內(nèi)軟骨藻酸的富集。ASP可以引起劑量依賴型的腹瀉、惡心、嘔吐癥狀。FDA對ASP的限量是20ppm。歐洲是20mgDA/kg。這個(gè)試劑盒可以檢測40個(gè)樣品（做兩個(gè)重復(fù)）。需要少量的樣品，檢測時(shí)間少于2小時(shí)。