病毒滅活目的:檢測原子力顯微鏡檢測對單純皰疹病毒的直接滅活作用——飛凡檢測重要的藥用植物成分Pentagalloylglucose(PGG)對單純皰疹病毒I型(HSV - 1)和單純皰疹病毒I型(HSV - 2)的直接滅活作用。

方法:利用空斑減數(shù)實驗檢測到PGG的直接滅活作用。利用原子力顯微鏡采用輕敲模式掃描成像( AFM)觀察PGG對HSV-1的病毒囊膜的破壞作用。

結(jié)果:PGG的半數(shù)抑制濃度(ICgo)分別為1. 88+0.19μM和2.59+0.35μM。AFM呈現(xiàn)了單純皰疹病毒三維圖像,可見病毒表面有凹凸不平的囊膜包裹,而PGG處理后的病毒無囊膜,降低了病毒的感染性。

結(jié)論:原子力顯微鏡是一種制樣簡單、真實可信的新型病毒形態(tài)學(xué)研究工具,為病毒檢驗和抗病毒藥物的開發(fā)提供了新的手段。

1,2,3,4,6-五-0-沒食子酰基-b-D-葡萄糖從余甘子( Phyllanthus emblica L )的枝葉中提取而得,具有多種生物活性。余甘子來源于大戟科( Euphorbiaceae)葉下珠屬植物(Phyllanthus)的成熟果實,又名滇橄欖、油柑,廣泛分布于西亞北非、印度南部以及東南亞各地。我國西南至東南沿海地區(qū)均有分布。余甘子應(yīng)用于我國的中草藥、藏藥、蒙藥、傣藥、維吾爾藥等民族藥體系以及印度壽命吠陀傳統(tǒng)藥物體系中，均具有十分悠久的用藥史。

單純皰疹病毒屬于皰疹病毒科、a皰疹病毒亞科,是*早發(fā)現(xiàn)的人類皰疹病毒,分為I型(HSV-1)與II型(HSV-2)兩個血清型,其感染十分普遍，呈全球性分布。HSV-1多感染口、唇、眼的皮膚與粘膜，以及中樞神經(jīng)系統(tǒng),偶見于生殖器感染;HSV-2多與新生兒感染和生殖器感染相關(guān)。而目前臨.床常用的治療藥物主要是無環(huán)鳥苷(ACV)等核苷類藥物,其作用靶點是病毒DNA聚合酶，進(jìn)而影響病毒的復(fù)制，但容易產(chǎn)生耐藥性抗病毒譜窄且價格高昂，故篩選研發(fā)毒性小，作.用機(jī)理不同的抗病毒藥物尤為重要。

原子力顯微鏡檢測Pentagalloylglucose對單純皰疹病毒的直接滅活作用

HSV為有囊膜的DNA病毒,病毒粒子直徑約120 nm ~150nm,其結(jié)構(gòu)可分為四部分:(1)脂質(zhì)囊膜,其上含11種病毒糖蛋白突起,大多與病毒吸附、穿人宿主細(xì)胞、誘導(dǎo)細(xì)胞間融合以及刺激機(jī)體免疫反應(yīng)相關(guān);(2)皮層,主要含有a反式誘導(dǎo)因子(xTIF)、病毒體宿主關(guān)閉蛋白( VHS)等病毒間層蛋白;(3) 20面體核衣殼;(4)病毒基因組及DNA結(jié)合蛋白構(gòu)成的核心。

長期以來,病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)的研究主要依賴于透射電子顯微鏡(TEM)和X2射線衍射技術(shù),但電鏡制樣復(fù)雜并需要真空觀察,X2線銜射技術(shù)需要獲得晶體或其他高度有序的方式才能進(jìn)行分析,這些缺陷限制了兩者的廣泛應(yīng)用。原子力顯微鏡(AFM)是由德裔物理學(xué)家G. Binnig 等于1986年發(fā)明,是掃描探針顯微鏡家族的重要成員之一,是一種適合于觀察非導(dǎo)電物質(zhì)的生物力學(xué)工具。其橫向分辨率為2 nm~3 nm,縱向分辨率為0.5nm。它可以在接近生理環(huán)境的大氣或液體條件下成像,獲得所觀察物體直觀的三維表面信息，因此在核酸、蛋白質(zhì)、細(xì)菌、病毒等生物結(jié)構(gòu)的研究中較其它觀測手段更具明顯優(yōu)勢,并成為改造原子分子的手段。AFM用于病毒研究的優(yōu)勢不僅在于制樣簡單,對病毒結(jié)構(gòu)影響小,更重要的是可以在生理條件下，動態(tài)觀察病毒的形態(tài)及生理過程。Turner等利用從AIDS病毒中提取的逆轉(zhuǎn)錄酶修飾AFM橫梁，使之成為一種能檢測抑制酶的活力和篩選使AIDS病毒失活藥物的方法。

AFM的探針位于微懸臂的底面末端,微懸臂對力非常敏感。AFM主要有兩種成像模式,接觸模式和輕敲模式。接觸模式掃描時,針尖一直與樣品表面接觸,優(yōu)點是掃描速度快，可獲得原子級的分辨率,缺點是橫向力會影響圖像的原始特征,對柔軟的樣品易造成損害。輕敲模式掃描時，微懸臂在其共振頻率或接近此頻率處振動，針尖間斷地“輕敲”樣品表面，這種模式的優(yōu)點是消除了橫向力,針尖與樣品之間每次接觸的時間很短，對樣品的損壞小，適用于柔軟生物分子的研究。