材料與方法

材料

AFP購自上海領潮公司。SP2／0骨0髓瘤細胞(中科院上海細胞庫)。8～12周齡Balb／c小鼠(第四軍0醫(yī)大學實驗動物中心)。SPF級。

方法

1．動物免0疫：將4只8～12周齡Balb／c小鼠隨機分為兩組，每組2只，分別命名為1號和2號(第yi組)、3號和4號(第二組)。第yi組按常規(guī)免0疫方法進行免0疫一…，第二組采用改良的免0疫方法進行免0疫。免0疫前靜脈采集少量血液，析出血0清作為后續(xù)檢測的陰性對照血0清。

第yi組：AFP50ug(50肚1)與等量福氏完全佐劑(Sigma，美國)混合，充分乳化后注入8～12周齡Balb／c小鼠腹腔，2周后用同量抗原加不完全福氏佐劑(Sigma，美國)腹腔注射，4周后用同量抗原加不完全福氏佐劑腹腔注射，融合前3d作腹腔注射加強免0疫。

腹0水的純化

采集復水后，12 000 r/min 離心 15 min，質(zhì)粒轉染試劑，去掉 沉淀等雜質(zhì)。往離心后的腹0水中加入等體積的PBS，并添加硫酸銨固體至 50% 飽和，靜置 2 h，12 000 r/min離心15 min，棄 上 清，用 PBS 重 新 溶解 沉 淀，然 后 再次加入硫酸銨固體至 45% 飽和，靜置兩個小時左右，12 000 r/min 離心 15 min棄去上清，用少量 PBS 溶解沉淀，即得到較純的抗0體，對 PBS 透析除去硫酸銨，透析時間為24h，透析過程中更換透析液兩至三次。

試劑與儀器

試 劑: pET28a-mrj 轉 Rosetta 菌 0種 由 本 實 驗 室 所保存。免0疫佐劑 購自北京康碧泉公司;HAT 選擇性培養(yǎng)基、HT 培養(yǎng)基、8-Azaguanine 和融合試劑 50% PEG 購自美國 Sigma公司; 胎牛血0清及 PRMI 1640 培 養(yǎng) 基 為 Hyclone 產(chǎn) 品; 辣 根 過 氧 化 物 酶( HRP)標記山羊抗小鼠 IgG ; 8 周齡雌性健康 BALB / c 小鼠，本實驗室飼養(yǎng); 小鼠骨0髓瘤細胞 SP2 /0由南京大學贈送，融合前兩星期復蘇并經(jīng) 8-Azaguanine篩選; 其他試劑均為國產(chǎn)分析分析純。

儀器: 二 氧 化 碳 培 養(yǎng) 箱( Thermo) ; 倒 置 顯 微 鏡( Olympus) ; 細胞培養(yǎng)耗材，96孔板、24 孔板、6 孔細胞培養(yǎng)板、移液qiang( Corning) ; 1 mL 的 A 蛋白層析柱

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