所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應功能的分子機制剛剛開始研究。外泌體被視為特分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。
一類外泌體中常見的細胞質蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內體中,RAB7 和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81 和CD9))、
熱休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2和HSP90以及一些細胞特的蛋白包括A33(結腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(GAPDH,烯醇化酶 1, 醛縮酶 1, PKM2, PGK1, PDIA3, GSTP1,DPP4, AHCY, TPL1, 抗氧化蛋白,P4HB, LDH, 親環(huán)素 A,FASN, MDH1 和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉導因子(黑色素瘤分化相關因子,ARF1, CD2, 人類紅細胞膜整合蛋白, SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。
一是超速離心法,這是外泌體提取Zui常用的方法 。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊,由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種 方法得到的是微泡不是外泌體 。
三是密度梯度離心法, 用此種方法分離到 的外泌體純度 高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。
五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內注射。2016.9《Scientific Reports》 雜志發(fā)表了該方法數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當高純度的外泌體。
<div class="para"white-space:normal;word-spacing:0px;text-transform:none;zoom:1;font-weight:400;color:#333333;font-style:normal;orphans:2;widows:2;letter-spacing:normal;line-height:24px;background-color:#ffffff;text-indent:2em;overflow-wrap:break-word;font-variant-ligatures:normal;font-variant-caps:normal;-webkit-text-stroke-width:0px;text-decoration-thickness:initial;text-decoration-style:initial;text-decoration-color:initial;"label-module="para" data-pid="15"> 六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在 電鏡下大小均 一,但是需要特殊的設備 , 應用不廣泛 。
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