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外泌體
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外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體首次于綿羊網(wǎng)織紅細胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)
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所有培養(yǎng)的細胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運載物”和相應(yīng)功能的分子機制剛剛開始研究。外泌體被視為特分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)
外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年,Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌 的exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質(zhì),不僅僅是mRNA,exosomes所轉(zhuǎn)移的microRNA同樣具有生物活性,在進入靶細胞后可以靶向調(diào)節(jié)細胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止已經(jīng)通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質(zhì)、2838種microRNA、3408種mRNA。吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)
一類外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和 RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7 和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體?,F(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易澹–D63,CD81 和CD9))、
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熱休克蛋白家族((HSP60, HSP70, HSPA5, CCT2和HSP90以及一些細胞特的蛋白包括A33(結(jié)腸上皮細胞來源)、MHC-Ⅱ(抗原提呈細胞來源)、CD86(抗原提呈細胞來源)以及乳凝集素(不成熟的樹突狀細胞)。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶(GAPDH,烯醇化酶 1, 醛縮酶 1, PKM2, PGK1, PDIA3, GSTP1,DPP4, AHCY, TPL1, 抗氧化蛋白,P4HB, LDH, 親環(huán)素 A,FASN, MDH1 和CNP)、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子(黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1, CD2, 人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子(MFGE8、整合素)、細胞骨架蛋白以及泛素等。吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)

外泌體的提取主要包括以下幾種方式。
一是超速離心法,這是外泌體提取Zui常用的方法。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊, 由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種方法得到的是微泡不是外泌體 。吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)
二是過濾離心, 這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性,但同樣存在純度不足的問題。
三是密度梯度離心法, 用此種方法分離到 的外泌體純度高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。
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吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)四是免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整,特高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH 和非 生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性, 不便進行下一步的實驗。
五是PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9《Scientific Reports》 雜志發(fā)表了該方法數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。 吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)
六是色譜法,這種方法分離到的外泌體在 電鏡下大小均 一,但是需要特殊的設(shè)備 , 應(yīng)用不廣泛 。吉林干細胞外泌體美容怎么樣廣東暨南基因大學(xué)
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生物醫(yī)藥,械二,械三,化妝品原料

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