RPA與LAMP對比

LAMP:環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增法的特征是針對目標(biāo)DNA鏈上的六個區(qū)段設(shè)計四個不同的引物然后再利用鏈置換反應(yīng)在一定溫度下進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)只需要把基因模板、引物、鏈置換型DNA合成酶、基質(zhì)等共同置于一定溫度下(60～65℃)、經(jīng)一個步驟即可完成。

RPA：主要依賴于三種酶：能結(jié)合單鏈核酸(寡核苷酸引物)的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白(SSB)和鏈置換DNA聚合酶。

重組酶與引物結(jié)合形成的蛋白-DNA復(fù)合物，能在雙鏈DNA中尋找同源序列。一旦引物定位了同源序列，就會發(fā)生鏈交換反應(yīng)形成并啟動DNA合成，對模板上的目標(biāo)區(qū)域進(jìn)行指數(shù)式擴(kuò)增。被替換的DNA鏈與SSB結(jié)合，防止進(jìn)一步替換。在這個體系中，由兩個相對的引物起始一個合成事件。

TwistDx

TwistDx Inc. 由分子生物學(xué)家兼蛋白生物化學(xué)家 Niall Armes 博士以及 Derek Stemple博士和 Nagesh Mahanthappa 博士于 1999年共同創(chuàng)立，nfo試劑盒公司，其總部位于英國馬薩諸塞州劍橋市。TwistDx Limited 于 2002年成立，其運營設(shè)施位于英國劍橋。

我們的愿景：TwistDx 希望將 RPA分子檢驗和技術(shù)普及到所有可應(yīng)用領(lǐng)域，使科學(xué)家和技術(shù)開發(fā)人員不再受到高溫 DNA 擴(kuò)增技術(shù)的束縛。

TwistDx試劑盒

常見的是核酸檢測試劑盒。一般多為qpcr方法的，也有多重pcr的。檢測新型冠狀病毒特異序列的方法常見的是熒光定量PCR（聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）。因PCR反應(yīng)模板僅為DNA，因此在進(jìn)行PCR反應(yīng)前，進(jìn)口nfo試劑盒公司，應(yīng)將新型冠狀病毒核酸（RNA）逆轉(zhuǎn)錄為DNA。在PCR反應(yīng)體系中，包含一對特異性引物以及一個Taqman探針，進(jìn)口nfo試劑盒公司，該探針為一段特異性寡核苷酸序列，兩端分別標(biāo)記了報告熒光基團(tuán)和淬滅熒光基團(tuán)。探針完整時，進(jìn)口nfo試劑盒公司，報告基團(tuán)發(fā)射的熒光信號被淬滅基團(tuán)吸收；如反應(yīng)體系存在靶序列，PCR反應(yīng)時探針與模板結(jié)合，DNA聚合酶沿模板利用酶的外切酶活性將探針酶切降解，報告基團(tuán)與淬滅基團(tuán)分離，發(fā)出熒光。每擴(kuò)增一條DNA鏈，就有一個熒光分子產(chǎn)生。熒光定量PCR儀能夠監(jiān)測出熒光到達(dá)預(yù)先設(shè)定閾值的循環(huán)數(shù)（Ct值）與病毒核酸濃度有關(guān)，病毒核酸濃度越高，Ct值越小。不同生產(chǎn)企業(yè)的產(chǎn)品會依據(jù)自身產(chǎn)品的性能確定本產(chǎn)品的陽性判斷值。

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