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恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒設(shè)計(jì)及儲(chǔ)存
熒光探針設(shè)計(jì):
在上下游引物中間，設(shè)計(jì)--段長(zhǎng)度為46-52nt與目的片段互補(bǔ)的序列作為熒光探針;
探針序列不與特異性引物識(shí)別位點(diǎn)重疊，長(zhǎng)度為46-52 nt，序列避免回文序列、內(nèi)部二級(jí)結(jié)構(gòu)和連續(xù)的重復(fù)堿基。
試劑盒儲(chǔ)存:
運(yùn)輸條件:低溫運(yùn)輸;
儲(chǔ)存條件:儲(chǔ)存溫度≤-20°C ，避光保存，避免重壓、反復(fù)凍融:
產(chǎn)品有效期: 12個(gè)月。
恒溫快速擴(kuò)增試劑盒常用酶原料
尿DNA糖基化酶尿DNA糖基化酶(UDG酶)又稱尿-N-糖基化酶(UNG酶)，可水解含尿的單鏈和雙鏈DNA釋放出游離尿，而對(duì)RNA無(wú)活性，與dUTP搭配使用，可建立成PCR防污染體系。其原理如下：在PCR體系中將dTTP部分或全部替換為dUTP后，使得反應(yīng)生成含有dU堿基的擴(kuò)增產(chǎn)物，這些擴(kuò)增產(chǎn)物不同于天然模板，在進(jìn)入含有UDG酶的反應(yīng)體系時(shí)，可被UDG酶識(shí)別并切割尿堿基與糖磷酸骨架間的N-糖基鍵，而經(jīng)切割后的DNA鏈在堿性或高溫條件下易于斷裂降解，從而失去被當(dāng)作模板再擴(kuò)增的能力，因此可防止擴(kuò)增子污染（如下圖）。市面上的UDG酶主要有普通型和熱敏型，其中熱敏型UDG酶在室溫條件下即可催化反應(yīng)，50℃以上加熱可使其滅活，膠體金試紙條型WLB8201KIT試劑盒公司，防止其降解后續(xù)PCR形成的含dU擴(kuò)增產(chǎn)物。雖然UDG/dUTP體系具有防污染功能，RNA型WLB8201KIT試劑盒公司，但在實(shí)際測(cè)試中還得兼顧PCR的效率和靈敏度。一方面需確保PCR擴(kuò)增產(chǎn)物摻入足夠量的尿堿基，熒光型WLB8201KIT試劑盒公司，從而可被UDG有效切割；另一方面也需要保證反應(yīng)體系添加的dUTP不會(huì)明顯影響PCR效率，因此dTTP和dUTP的佳比例需通過(guò)優(yōu)化確定。
科普｜恒溫?cái)U(kuò)增試劑盒常用酶原料
NEAR相關(guān)酶
切口酶擴(kuò)增反應(yīng)(Nicking Enzyme AmplificationReaction，NEAR)是一種基于切刻內(nèi)切酶切割特性的恒溫?cái)U(kuò)增方法，詳細(xì)原理可參考啥黑科技可10分鐘完成核酸分子檢測(cè)？。其使用的酶有兩種：切刻內(nèi)切酶：如Nt.BstNBI切刻內(nèi)切酶，該類酶不同于常規(guī)限制性內(nèi)切酶，其識(shí)別特定序列后僅在DNA其中一條鏈上切割形成缺口，WLB8201KIT試劑盒公司，并暴露出游離的3’端；DNA聚合酶：如Vent(exo-) DNA聚合酶或Bst DNA聚合酶，用于DNA鏈合成，同時(shí)具有鏈置換功能。
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