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                                                                 活動(dòng)時(shí)間：8月15日-9月24日

t4 dna連接酶（快速）

產(chǎn)品描述
t4 dna連接酶催化雙螺旋dna或rna的5′磷酸末端基團(tuán)和3′羥基末端基團(tuán)之間形成磷酸二酯鍵。該酶能夠有效的連接平末端和黏性末端，同時(shí)修復(fù)雙螺旋dna、rna或dna/rna雜交鏈中的單鏈缺口。

蛋白來源
攜帶克隆的t4 dna連接酶基因的重組大腸桿菌菌株。
組成成分：
10 mm tris-hcl
50 mm kcl
1 mm dtt
0.1 mm edta
50% glycerol
ph 7.5 @ 25°c
隨酶提供：
b1010 (2x rapid ligation buffer)
b6030 (10x t4 dna ligase buffer)
2x rapid ligation buffer (b1010):
132mm tris-hci
20 mm mgcl2
2 mm dtt
2 mm atp
15% peg 6000
ph 7.6 @ 25°c
10x t4 dna ligase buffer (b6030):
500mm tris-hci
100 mm mgcl2
50 mm dtt
10 mm atp
ph 7.6 @ 25°c
單位定義
1 unit 被定義為23°c下、30分鐘內(nèi)，在50 μl 1x t4 dna連接酶緩沖液中能夠連接50%的具有粘性末端的100 ng dna片段的dna連接酶量。
產(chǎn)品信息
t4 dna ligase (rapid)
part number  l6030-hc-f
concentration  600,000 u/ml
unit size            26,000 u
sds          available on request
產(chǎn)品特性
storage temperature     -25 to -15°c
test                           specification
purity (sds-page)           >99%
specific activity        300,000 u/mg
ss exonuclease      6,000 u <1.0% released
ds exonuclease      6,000 u <1.0% released
ds endonuclease     6,000 u = no conversion
e.coli dna contamination 6,000 u <10 copies
產(chǎn)品要點(diǎn)：
t4 dna連接酶是atp依賴的酶。建議舍棄在-20°c儲(chǔ)存一年的反應(yīng)緩沖液，用新鮮的緩沖液代替以確保Zui大性能。當(dāng)把一個(gè)嵌入物當(dāng)做目標(biāo)靶物：矢量比在2到6之間時(shí)，單個(gè)嵌入的連接反應(yīng)是的。6:1以上的比率將會(huì)促進(jìn)多重片段的嵌入，當(dāng)下降到2:1比率時(shí)，將會(huì)降低連接效率。
對(duì)于有疑問的連接反應(yīng)或如果dna濃度是未知的，那就有必要將比率多樣化并進(jìn)行多重連接反應(yīng)。
高濃度的peg將會(huì)顯著的降低電能細(xì)胞的轉(zhuǎn)化效率。為了將電能細(xì)胞轉(zhuǎn)化效率Zui大化，下面給出寫推薦的方法：
的：在接下來的連接反應(yīng)中，利用dna凈化吸附柱來凈化產(chǎn)物，并用50ul的te洗提。dna即準(zhǔn)備轉(zhuǎn)化。dnaZui終被轉(zhuǎn)化的量應(yīng)該在0.1-10 ng的范圍之間。
較好的：在ddh20 或te中稀釋連接產(chǎn)物將會(huì)降低peg濃度。dnaZui終被轉(zhuǎn)化的量應(yīng)該在0.1-10 ng的范圍之間。
高濃度的t4 dna連接酶與2x快速連接緩沖液相結(jié)合能夠顯著提高平末端連接的速度和效率，因此不建議有較長(zhǎng)的潛伏期（>10分鐘），因?yàn)殚L(zhǎng)的潛伏期能夠顯著的降低連接產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化效率。為了將正確嵌入或矢量結(jié)合的轉(zhuǎn)化效率Zui大化，建議使用下面的方案。
酶的10x t4 dna連接酶緩沖液不包含peg，并與標(biāo)準(zhǔn)連接反應(yīng)方案一致，該方案并沒指定利用快速的緩沖區(qū)規(guī)格。
操作說明：
反應(yīng)體系:
體積                   組分                                 終濃度
10 μl      2x rapid ligation buffer              1x
x μl                vector                                1-10 ng/μl
x μl               insert                                      1-10 ng/μl
1 μl        t4 dna ligase (600 u/ μl)          30 u/μl
x μl            type i water                              n/a
20 μl                                                           總體積
加入以上所有成分于反應(yīng)管中，吹打混勻，25℃，10min孵育，立即使用pcr洗脫柱進(jìn)行dna的純化，洗脫于50ulte或雙蒸水存儲(chǔ)或者直接進(jìn)行稀釋（稀釋比例至少1：10）并進(jìn)行轉(zhuǎn)化，將0.1-10ng 連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)入相應(yīng)載體的電轉(zhuǎn)或鈣轉(zhuǎn)的感受態(tài)細(xì)胞中。
參考文獻(xiàn)
engler, m.j. and richardson, c.c. (1982) p.d. boyer (eds.), the enzymes, 5, pp. 3. san diego: academic press.
適用范圍
該產(chǎn)品被研制、生產(chǎn)加工及銷售，僅用于體外，不適用于人類和動(dòng)物注射。

活動(dòng)將同步于丁香通8.24-9.24秋季促銷活動(dòng)以及科苑商城店鋪促銷!